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一种高通量的CRISPR/Cas9材料靶点检测方法在大豆中的应用研究

文献类型： 中文期刊

作者： 彭丽华;欧阳文琦;曹东;郭葳;杨红丽;郝青南;陈水莲;张婵娟;袁松丽;陈海峰;沙爱华;陈李淼

作者机构：

关键词： 大豆;CRISPR/Cas9;DNA快速提取法;靶点检测;高通量

期刊名称：中国油料作物学报

ISSN： 1007-9084

年卷期： 2025 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： CRISPR/Cas9基因编辑技术已经被广泛地应用于多种植物中，常规基因编辑靶点检测方法实验繁琐且耗时，成本较高，开发更简便和高通量的方法可以极大提高靶点检测的效率。本实验以南方大豆品种天隆一号为材料，开发了一种叶片DNA的快速提取方法——水磨法，缩短DNA提取和检测时间，并且提取的DNA可以保存20 d。此外，本文还进一步研究了将提取液替换为TE buffer后，在煮沸条件下，DNA的稳定性分析。结果表明：煮沸1 min、3 min、5 min和10 min后，4℃或-20℃放置的DNA样品均可以保存45 d。然后，将天隆一号为遗传背景的待测材料中的靶点序列PCR产物进行毛细管电泳，与对照材料相比，观察是否存在差异碱基的特异性条带，进而判断待测材料是否发生基因编辑及可能存在的编辑类型种类。本文将植物叶片DNA快速提取法和毛细管电泳技术相结合，更加快速、高通量地筛选大豆材料的突变情况及突变种类，为大豆重要性状基因功能分析提供技术支持。

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