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牛支原体脂质相关膜蛋白P48、DnaK和L-LDH免疫反应原性的鉴定及分析

文献类型： 中文期刊

作者： 刘桐;潘巧;谨瑾;曾金红;李媛;徐青元;辛九庆

作者机构：

关键词： 牛支原体 ; 膜蛋白 ; 分子筛 ; 免疫反应原性

期刊名称：中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2021 年 43.0 卷 6.0 期

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; CSCD（2020-2021年度） ; 农林核心（2020版） ; 科技核心（2020版）

摘要： 为筛选并鉴定免疫反应原性良好的牛支原体(M.bovis)蛋白,本研究提取M.bovis TJ株脂质相关膜蛋白(LAMPs),通过AKTA分子筛筛选,将M.bovis LAMPs分为5组,经dot blot试验鉴定各组LAMPs的免疫反应原性,并经蛋白质谱分析其蛋白组分.结果显示,5组LAMPs中有1组膜蛋白反应原性较好,且结合蛋白匹配度得分的排名顺序和基因注释,选定P48、DnaK和L-LDH为候选蛋白.将该3种蛋白经原核表达、纯化及western blot检测其反应原性;并进一步分别以该3种重组蛋白为包被抗原,采用ELISA方法(rP48-ELISA、rDnaK-ELISA、rL-LDH-ELISA)检测并利用Graphpad prism 8软件分析并计算该3种方法的特异性、敏感性及其与牛鼻支原体、丝状支原体丝状亚种SC型、牛病毒性腹泻病毒、口蹄疫病毒、牛传染性鼻气管炎病毒阳性血清的交叉反应性.Western blot结果显示,3种重组蛋白均能与M.bovis阳性血清反应,反应原性较好;ELISA结果显示,rP48-ELISA、rDnaK-ELISA、rL-LDH-ELISA方法的特异性分别为96％、94％和98％,敏感性分别为98％、92％和94％.交叉反应性试验结果显示,M.bovis rDnaK和rL-LDH均能与牛鼻支原体阳性血清发生交叉反应,而M.bovis rP48与牛其他临床常见呼吸道病原阳性血清均无交叉反应,表明其具有作为检测M.bovis ELISA方法候选包被抗原的潜力.本研究为进一步筛选M.bovis亚单位疫苗抗原及快速诊断方法的候选抗原奠定实验基础.

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  • 相关文献

[1]中国西部和北部边境4省区牛支原体血清流行病学调查及分析. 李媛,闫磊,刘桐,辛九庆. 2021

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