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利用水稻转化愈伤组织评估引导编辑效率

文献类型： 中文期刊

作者： 杨茜;孟祥兵;王春;刘婷婷;王克剑;余泓;饶玉春;邹金鹏

作者机构：

关键词： 水稻;PE技术;愈伤组织;二代测序;精准编辑;评估体系

期刊名称：科学通报

ISSN： 0023-074X

年卷期： 2024 年

页码：

收录情况： EI（2024版） ; ; 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2024版）

摘要： 引导编辑(prime editing, PE)作为新一代精准基因组编辑技术,能够实现任意类型碱基替换、小片段DNA插入和缺失,已成功应用于作物性状改良及新种质创制.然而,目前在某些位点上, PE编辑效率较低,无法实现预期目标编辑.因此,为了提升工作效率并加快获取目标编辑植株的速度,需建立一套完整的PE效率评估体系,用以评估不同位点的精准编辑效率.本研究选择6个已知具有不同编辑效率的PE载体,通过农杆菌介导的遗传转化法将其转化到水稻愈伤组织,随后对转化后的愈伤组织进行不同时间点连续取样,并利用高通量二代测序技术进行检测,以研究PE技术介导的精准编辑在整个愈伤组织转化过程中发生的时间和效率.实验结果显示,最早在侵染后第13天的愈伤组织中就能检测到精准编辑的发生,从第13天开始,编辑效率逐渐上升,并在第30天的愈伤组织中达到最大值.特别地,在侵染后第15天的愈伤组织中,不同位点的编辑效率与植株中的编辑效率呈良好的对应关系,因此,该时间点可用于评估植株中PE精准编辑效率.该PE效率评估体系的建立,为评估植株精准编辑效率提供了参考,有助于精准编辑在作物改良中的应用.

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