文献类型： 中文期刊
作者： 杨洪早;朱杰;郭宏元;汤傲星;陈少宇;刘春草;张达;袁莉刚;刘光清
作者机构：
关键词： C11orf96;基因克隆;多克隆抗体;亚细胞定位
期刊名称：畜牧兽医学报
ISSN： 0366-6964
年卷期： 2022 年
页码：
收录情况： 北大核心（2020版） ; CSCD（2021-2022年度） ; 科技核心（2021版） ; 农林核心（2020版）
摘要： 本研究旨在通过克隆猫源C11orf96（Felis catus C11orf96，fC11orf96）基因，并制备其多克隆抗体分析该基因在细胞中的定位。以猫肾细胞cDNA为模板克隆fC11orf96基因，并利用无缝重组连接成功构建重组质粒pET-32a（+）-fC11orf96-Fe。随后将重组质粒转化至BL21（DE3） 感受态细胞，经IPTG诱导后成功表达fC11orf96-Fe重组蛋白，并利用该重组蛋白制备多克隆抗体。最后利用Western blot及间接免疫荧光试验分析多克隆抗体的有效性及其细胞定位。结果表明成功获得猫C11orf96基因CDS序列全长372 bp，可编码124个氨基酸，表达的fC11orf96-Fe蛋白主要以包涵体形式存在，蛋白大小约49 ku。由该重组蛋白制备的多克隆抗体能够识别细胞内源性fC11orf96蛋白和外源真核表达蛋白，并且发现fC11orf96蛋白定位于细胞质。本研究成功克隆得到猫C11orf96基因，并且fC11orf96蛋白定位于细胞质，为后续研究C11orf96的生物学功能奠定了基础。
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