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施马伦贝格病毒N蛋白的原核表达及其单克隆抗体制备

文献类型： 中文期刊

作者： 仇槿昕;侯辉;孙法壮;冯耀宇;李维克

作者机构：

关键词： 施马伦贝格病毒;核衣壳蛋白;原核表达;细胞融合;单克隆抗体

期刊名称：中国草食动物科学

ISSN： 2095-3887

年卷期： 2025 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 施马伦贝格病毒（Schmallenberg virus，SBV）是一种新型正布尼亚病毒，主要感染牛、绵羊和山羊等反刍动物。SBV的核衣壳蛋白（N）已被证明是血清学检测的理想靶抗原。本研究将SBV N基因的全长编码序列克隆至pET-28a(+)载体，构建重组质粒pET-28a-SBV-N，转化Rosseta至感受态细胞中，IPTG诱导表达N蛋白。采用Ni-NTA琼脂糖亲和层析法纯化His-SBV-N蛋白，以获得的N蛋白免疫BALB/c小鼠，3次免疫后取效价高的小鼠的脾细胞与SP2/0细胞进行细胞融合，制备得到针对SBV N蛋白的单克隆抗体（McAbs），并通过间接ELISA筛选分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞。最终获得3株稳定分泌抗N单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为2B1、2B2和3F2。抗体亚型鉴定均为IgG2a。Western Blot 和ELISA检测结果表明，这3株单抗在酶联免疫吸附试验中与重组SBV N蛋白具有良好的反应性，重组N蛋白的表达和单抗的成功制备为SBV的血清学诊断提供了重要材料。

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