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猪瘟野毒株与疫苗株双重TapMan实时定量PCR方法的建立与应用

文献类型： 中文期刊

作者： 朱丽珂;房永祥;李皖豫;刘娟;高真贞;贾怀杰;何小兵;陈国华;娄忠子;李维克;景志忠

作者机构：

关键词： 猪瘟病毒; 野毒株; 疫苗株; TapMan探针; 双重实时定量PCR

期刊名称：中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2021 年 12 期

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; CSCD（2020-2021年度） ; 农林核心（2020版） ; 科技核心（2020版）

摘要： 为实现对猪瘟野毒株与疫苗株之间的快速鉴别，本试验建立了一种猪瘟野毒株与疫苗株的双重TapMan实时定量PCR的检测方法。通过对GenBank公布的猪瘟病毒野毒株及疫苗株的全基因组序列进行比对和分析，设计出2对特异性引物及2条TapMan探针，经反应体系及反应条件优化后，对其特异性、稳定性及敏感性进行了验证。结果显示，本方法能特异性地对猪瘟野毒株及疫苗株进行鉴别检测，并且不与其他常见的猪源病毒产生交叉反应，组内和组间检测变异系数均小于1％，敏感性较普通RT-PCR分别高出100倍和1000倍以上，且野毒株与疫苗株的最低检测下限分别在1.3 copies/μL和1.58 copies/μL。应用本方法对实验室保存的甘肃某猪场猪瘟活疫苗免疫前、后的56份已知背景的样本进行检测，结果，阳性符合率高达100％。本方法特异性强，稳定性和灵敏度高，不仅能对准确定量，并且可快速地对同一个样品中猪瘟病毒野毒株、疫苗毒株进行检测，为后续猪瘟净化效果的评估提供了新的技术手段。

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