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猫疱疹病毒gB蛋白优势抗原表位的串联表达及间接ELISA方法的建立和应用

文献类型： 中文期刊

作者： 朱雯琪;王真真;李娜;汤傲星;宋若楠;贾楠楠;杜汉宇;朱杰;李传峰;程松;刘光清;孟春春

作者机构：

关键词： 猫疱疹病毒;gB蛋白;优势抗原表位;串联表达;间接ELISA

期刊名称：中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2025 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 为建立检测猫疱疹病毒特异性抗体的血清学检测方法，将主要保护性抗原gB基因的显性表位进行串联表达，然后以串联重组蛋白作为包被抗原，建立间接ELISA检测方法。通过棋盘法，优化并确定血清稀释比例和抗原包被浓度。在此基础上，对其他实验条件进行了进一步优化。结果显示，该方法的最佳包被抗原浓度为0.5 μg/mL，待测血清的最佳稀释倍数为1:1 000。酶标二抗的最佳稀释度确定为1:10 000，其相应的反应条件为37℃孵育1 h；TMB底物的显色时间为15 min（37℃避光）。特异性评估显示，该方法与FPV和FCV阳性血清无交叉反应。灵敏度试验表明，该检测方法对猫疱疹病毒阳性血清的最低检测限为1:20 480。稳定性试验表明，组内和组间的变异系数均小于5%。选用48份猫血清用本研究建立的间接ELISA法与全病毒建立的ELISA方法进行平行比较。并选择20份血清与市售的Biogal 试剂盒进行对比。与全病毒包被的ELISA总体符合率为98%，与Biogal试剂盒总体符合率为95%。基于串联表达的重组gB蛋白为包被抗原建立的间接ELISA方法可用于检测猫疱疹病毒特异性抗体，并为未来评估疫苗效力提供了有力的技术支持。

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