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绵羊乳源性核酸定性标准样品的研制

文献类型: 中文期刊

作者: 田昊昀;田文怡;陈爱亮;李亮;李相阳;张娟

作者机构:

关键词: 计量学;绵羊乳;定性;标准样品;实时荧光PCR

期刊名称:计量科学与技术

ISSN: 2096-9015

年卷期: 2025 年 12 期

页码:

收录情况: 无来源刊(2025版)

摘要: 绵羊乳源性核酸定性标准样品在乳源性成分核酸检测和食品安全质量控制中具有重要应用,但国内相关标准样品的研究尚处空白。本研究以牧场原奶为原料进行分子生物学鉴定分析,采用NY/T 3050-2016中的DNA提取方法完成核酸提取,经梯度稀释后于超净操作台进行分装,制备得到标准样品。随后,采用实时荧光PCR技术对样本均匀性和稳定性进行系统评估。并组织8家实验室,采用实时荧光PCR方法和Sanger测序方法进行联合定值,并计算参考Ct值的不确定度。结果表明,该样品经F检验在95%的置信区间范围内均匀性良好;在−20℃~45℃保存14天稳定性良好;经历25次冻融循环后稳定性良好。本批次标准样品的特征值为绵羊源性cytb基因阳性,其序列信息与国家标准GB/T 38164-2019附录A中扩增靶标序列一致,参考Ct值为20.08,不确定度为0.90(k=2)。综上所述,所研制的绵羊乳源性核酸定性标准样品的均匀性和稳定性良好,可为乳源性成分核酸检测提供可靠的技术支持,有利于食品安全和乳制品质量控制,填补了我国乳源核酸检测领域标准样品的空白,并推动食品检测技术标准化进程。

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