文献类型： 中文期刊
作者： 蔡霖颖;张子晨;毕庄莉;朱世强;张淼;樊益铭;唐净杰;汤傲星;刘惠文;丁莹莹;李琛;朱英奇;王桂军;刘光清
作者机构：
关键词： 猫过敏原;Fel d 1蛋白;单克隆抗体;抗原表位
期刊名称：细胞与分子免疫学杂志
ISSN： 1007-8738
年卷期： 2025 年
页码：
收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版）
摘要： 目的 目前国内尚未有针对猫主要过敏原（Feld1）的商品化定量检测试剂盒，为建立Feld1快速检测方法，本研究制备了Feld1蛋白的单克隆抗体。方法 本研究利用大肠杆菌密码子偏好性，对Feld1基因进行优化与合成，构建原核表达质粒pET-28a-Feld1，随后表达并纯化Feld1重组蛋白；对BALB/c小鼠进行免疫，制备单克隆抗体。以重组Feld1作为包被蛋白建立间接ELISA方法，筛选杂交瘤细胞株；利用Westernblot法验证单克隆抗体的特异性并鉴定其抗原表位。将筛选出的杂交瘤细胞株接种BALB/c小鼠腹腔，大量制备单克隆抗体。结果 结果表明，成功构建了重组质粒pET-28a-Feld1，对表达条件进行优化后获得了可溶性表达的Feld1蛋白。Westernblot及抗体效价测定结果显示，获得了2株稳定分泌抗Feld1特异性抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为7D11和5H4；抗体鉴定结果显示，5H4抗体亚型为IgG2a，可识别Feld1第105-163位氨基酸区域；7D11抗体亚型为IgG1，可识别Feld1第1-59位氨基酸区域。结论 本研究获得的高纯度重组Fel d 1蛋白将为临...
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