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抗丝状支原体丝状亚种单克隆抗体的制备及初步应用

文献类型： 中文期刊

作者： 曾金红;徐青元;沙玮萍;吴爽;李媛;辛九庆;王秀梅

作者机构：

关键词： 丝状支原体丝状亚种;M0071蛋白;单克隆抗体;间接免疫荧光检测

期刊名称：畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2022 年

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; CSCD（2021-2022年度） ; 科技核心（2021版） ; 农林核心（2020版）

摘要： 旨在制备抗丝状支原体丝状亚种（Mmm）的特异性单克隆抗体（MAb），为牛传染性胸膜肺炎（CBPP）病原诊断的免疫学方法提供特异性抗体。本研究利用生物信息学技术分析了Mmm国内分离株Ben-1不同传代株的全基因组序列，选取M0071蛋白作为研究对象。将原核表达的可溶性重组蛋白M0071（rM0071）作为免疫原免疫BALB/c小鼠，通过有限稀释法和间接ELISA方法筛选得到能稳定分泌抗rM0071蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株。进一步制备单抗腹水并纯化，利用Western blot方法对该单抗进行特异性鉴定，同时测定其抗体效价和抗体亚类。随后利用间接免疫荧光试验（IFA）评价该单抗对细胞感染Mmm的检测能力。结果表明成功获得1株单克隆细胞株3C4A1，将其分泌抗体命名为MAb 3C4A1。特异性结果表明，MAb 3C4A1能与Mmm的分离株和标准株发生特异性反应，而不与山羊支原体山羊肺炎亚种、丝状支原体山羊亚种、牛鼻支原体、无乳支原体、牛支原体、leachii支原体和牛A型巴氏杆菌等发生反应。抗体亚类鉴定MAb 3C4A1属于IgG1亚类、轻链为κ链。经间接ELISA测定其抗体效价为1 : 256 000。IFA试验结果表明，MAb 3C4A1仅与感染EBL细胞的Mmm发生绿色荧光反应，而与牛鼻支原体、无乳支原体、牛支原体感染的细胞不发生荧光反应，特异性良好。本研究制备的MAb 3C4A1具有良好的特异性和免疫反应性，可作为CBPP病原免疫学诊断的工具，为进一步研制CBPP病原鉴别诊断试剂盒提供了基础材料。

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