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猪囊尾蚴CE18重组蛋白的复性纯化及抗原性鉴定

文献类型： 中文期刊

作者： 张少华;贾万忠;骆学农;景志忠;吴国华;郑亚东;郭爱疆;才学鹏

作者机构：

关键词： 猪囊尾蚴;CE18重组蛋白;复性;纯化;透析;凝胶过滤层析

期刊名称：生物工程学报

ISSN： 1000-3061

年卷期： 2008 年 24 卷 08 期

页码： 1490-1495

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 猪囊尾蚴CE18重组蛋白(rCE18)在大肠杆菌表达后形成包涵体,为了获得高纯度的、有生物活性的rCE18,本研究采用超声破碎菌体,0.2%、2%DOC(脱氧胆酸钠)逐次洗涤包涵体及0.9%SKL(十二烷基肌氨酸钠)溶解包涵体后,利用透析与凝胶过滤层析技术相结合对rCE18进行复性和纯化。同时,采用GST-FF亲和柱层析及SDS-PAGE胶回收蛋白两种方法纯化rCE18,比较三者的纯化效果。并通过间接ELISA检测复性蛋白的生物学活性。结果表明:经透析与凝胶层析复性纯化后的rCE18蛋白的纯度可达到60%以上,活性回收率为41.3%,间接ELISA证实,复性后的rCE18蛋白能特异性识别猪囊虫阳性血清,检测敏感性高达97.2%,与全囊虫抗原检测的符合率为100%。本试验初步建立了猪囊尾蚴rCE18包涵体纯化及复性的有效方法,为猪囊尾蚴rCE18蛋白的诊断应用奠定了基础。

分类号： S852.7

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