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多房棘球蚴Calpain A基因克隆、表达及其多克隆抗体制备

文献类型： 中文期刊

作者： 李慧敏;张少华;张月玥;王帅;生鸿鹏;李雅琪;王得先;蒋佳颖

作者机构：

关键词： 多房棘球蚴;Calpain A;序列分析;基因克隆;表达纯化;多克隆抗体

期刊名称：中国病原生物学杂志

ISSN： 1673-5234

年卷期： 2025 年 20 卷 01 期

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版）

摘要： 目的 分析并克隆多房棘球蚴Calpain A(Em-Calpain A)基因开放阅读框(Open Reading Frame, ORF)序列，进行体外诱导表达并制备兔多克隆抗体。方法 从WormBase数据库下载多房棘球绦虫Em-Calpain A基因ORF序列。采用ProtParam、SMART等在线工具对其理化性质、蛋白结构域等进行分析和预测；利用MEGA 7.0软件的邻接法构建系统进化树。提取原头蚴总RNA并反转录为cDNA,PCR扩增Calpain A基因，构建pET28a-Em-Calpain A原核表达载体，经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白，纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体，采用10%SDS-PAGE、Western blot和ELISA对重组蛋白纯度和抗体滴度及反应性进行鉴定。结果 序列分析表明Em-Calpain A基因ORF长度为2 469 bp,编码822个氨基酸，推测理论分子质量约92.13 ku,等电点为5.3。蛋白结构分析显示Em-Calpain A具有1个高度保守的钙蛋白酶样硫醇蛋白酶结构域(CysPc)、1个钙蛋白酶Ⅲ结构域(Calpa...

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