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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒感染猪肺泡巨噬细胞的差异转录基因文库构建

文献类型： 中文期刊

作者： 肖燕;安同庆;田志军;韦天超;姜一峰;彭金美;周艳君;仇华吉;童光志

作者机构：

关键词： 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒;抑制性消减杂交;差异基因;cDNA文库

期刊名称：中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2009 年 31 卷 01 期

页码： 37-41

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为鉴定高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)HuN4株感染猪肺泡巨噬细胞(PAM)后,细胞内转录发生差异的基因,本研究采用抑制性消减杂交技术,以HP-PRRSV HuN4株感染后48h的PAM细胞mRNA为实验方(Tester),以未感染的PAM细胞为驱动方(Driver)进行消减杂交,得到了HP-PRRSV HuN4株感染后PAM内转录后发生上调的基因。反之,实验方与驱动方互换进行消减杂交,得到了HP-PRRSV HuN4株感染后PAM内转录后发生下调的基因。将2种杂交所得的差异转录基因经PCR扩增后分别克隆到T载体中并转化大肠杆菌感受态细胞,从而构建了正向(上调)和反向(下调)的差异cDNA文库。随机挑取文库中的多个克隆用PCR方法进行鉴定,结果表明差异文库中的cDNA具有较好的多样性。本研究为下一步的文库克隆的序列测定与差异基因的功能分析奠定了基础。

分类号： S852.651

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