数字农科院2.0

猪C型凝集素受体8A骆驼单域抗体酵母展示文库的构建

文献类型： 中文期刊

作者： 魏国燕;李坤;卢曾军;刘在新;孙普;白兴文;李冬;陈应理;包慧芳;李平花;付元芳;张婧;马雪青;曹轶梅

作者机构：

关键词： 猪CLEC8A基因;骆驼单域抗体;酵母展示文库;流式细胞术

期刊名称：中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2018 年 1 期

页码： 177-182

收录情况： 北大核心（2020版） ; CSCD（2020-2021年度） ; 农林核心（2020版） ; 科技核心（2020版）

摘要： 为构建猪C型凝集素受体8A(C-type lectin domain family 8,member A,CLEC8A)的单域抗体酵母展示文库,本文首先克隆出了猪CLEC8A基因编码区序列。通过SMART软件分析,鉴定出该受体胞外区基因序列,并插入原核表达载体pET28a(+),在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达出了猪CLEC8A胞外区蛋白。表达的蛋白经201佐剂乳化后免疫双峰驼,间接ELISA监测抗体滴度,于六免后15d分离骆驼外周血淋巴细胞。提取总RNA,反转录成cDNA后经巢式PCR扩增获得骆驼VHH基因。纯化的VHH片段与线性化的pCTCON2载体混合后共转入酿酒酵母感受态细胞(EBY100),经细胞内同源重组,成功制备了针对猪CLEC8A受体的骆驼单域抗体酵母展示文库。经菌落计数及测序鉴定结果表明,文库大小约为1.6×107,文库重组率达90%,文库多样性丰富。流式细胞术初步鉴定酵母细胞表面成功展示出抗猪CLE8A的单域抗体,为后续文库筛选奠定基础。

分类号： S852.4

  • 相关文献

[1]25份甘薯登记品种基因组大小测定. 苏一钧,王珧,戴习彬,赵路宽,张安,曹清河. 2019

[2]甘蔗及其近缘属倍性鉴定与分析. 刘昔辉,张荣华,桂意云,韦金菊,区惠平,段维兴,黄东亮,李杨瑞. 2018

[3]马鹿XY精子分选及冷冻精液制备试验. 高庆华,都惠中,韩春梅,魏海军,赵伟刚,卢全晟,张志国,张云梅,邬俊财. 2007

[4]猪流行性腹泻病毒N蛋白核仁定位信号对宿主细胞周期的影响. 刘随新,石达,陈建飞,张鑫,时洪艳,刘孝珍,张莎,王璐,冯力. 2013

[5]不同启动子在昆虫杆状病毒表达系统中的活性分析. 王煜,高辉,陈川,赵和平,李淼,孙元,仇华吉. 2008

[6]利用流式细胞术分析活化T淋巴细胞特性. 胡茂志,孟闯,潘志明,吴凤珍,高明燕,刘蓓蓓,焦新安,刘秀梵. 2008

[7]流式细胞术及其在细胞凋亡检测中的应用. 娜仁图娜拉,闫雷,赵瑞杰,关伟军,马月辉,哈斯苏荣. 2009

[8]梅花鹿XY精子分选及冷冻精液制备. 都惠中,魏海军,高庆华,韩春梅,赵伟刚,张志国,张云梅. 2008

[9]流式细胞术在乳酸菌自溶检测中的应用. 孙洁,吕加平,刘鹭,张书文. 2010

[10]不同日龄仔猪外周血T淋巴细胞的检测与分析. 邹璐,张景艳,张凯,王磊,张康,王旭荣,王学智,余四九,杨志强,李建喜. 2017

[11]猪CD163cDNA扩增及其稳定表达细胞系(CHO-K1)的建立. 徐建,霍珊珊,张建楼,张永红,崔丹,仲飞,李秀锦. 2016

[12]日本血吸虫14d童虫凋亡现象的观察. 郭小勇,洪炀,韩宏晓,曹晓丹,韩艳辉,张旻,傅志强,朱传刚,陆珂,李浩,林矫矫. 2014

[13]UVB辐射HaCaT细胞损伤模型的建立. 高薇,侯微,李伟,王玉帅,刘清秀,王英平. 2014

[14]猪CD163 cDNA扩增及其稳定表达细胞系(CHO-K1)的建立. 徐建,霍珊珊,张建楼,张永红,崔丹,仲飞,李秀锦. 2016

[15]日本血吸虫14d童虫凋亡现象的观察. 郭小勇,洪炀,韩宏晓,曹晓丹,韩艳辉,张旻,傅志强,朱传刚,陆珂,李浩,林矫矫. 2014

[16]流式细胞术研究细胞凋亡的方法与技术. 潘春留,闫雷,娜仁图娜拉,卿素珠,关伟军,马月辉. 2009

[17]流式细胞术在植物生物学研究中应用进展. 宋纯鹏. 2015

[18]利用流式细胞术测定大额牛基因组大小的研究. 贤明,陈燕,梁永虎,宋禹昕,牛红,张文刚,夏江威,张天留,许尚忠,张路培,高会江,李俊雅,高雪. 2018

[19]多聚甲醛处理的昆明小鼠T细胞及其亚群存放不同时间分析. 郭海婷,胡超,严普,李中原,陈志宝. 2017

[20]塞内卡病毒A结构蛋白VP1诱导PK-15细胞凋亡. 王咏,毛箬青,张克山,郑海学,刘湘涛. 2019

作者其他论文 更多>>