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基于多反应监测质谱技术的水稻叶片蛋白绝对定量方法

文献类型： 中文期刊

作者： 陈铭学 (2); 杨欢 +; 曹赵云 ; 马有宁 ; 曹珍珍 ; 程方民 *

作者机构：

关键词： 水稻叶片;蛋白质;多反应监测;SOD法;绝对定量

期刊名称：中国水稻科学

ISSN： 1001-7216

年卷期： 2020 年 NULL 卷 3 期

页码： 278-286

收录情况： 北大核心（2020版） ; CSCD（2020-2021年度） ; 农林核心（2020版） ; 科技核心（2020版）

摘要： [目的]建立水稻叶片蛋白的多反应监测(MRM)质谱绝对定量方法.[方法]水稻叶片蛋白经含1.0%十二烷基硫酸钠(SDS)的磷酸盐(PBS)缓冲液提取,丙酮沉淀除杂纯化、胰蛋白酶消化,酶解液经液相色谱分离,MRM质谱监测,外标法定量.[结果]向提取缓冲液中加入1.0%SDS可增强水稻叶片中16种靶蛋白和总蛋白质的提取效果;不同有机试剂处理,总蛋白质沉淀量存在显著差异(P<0.05),沉淀能力从强到弱依次为乙腈>丙酮>异丙醇>甲醇>乙醇;对于16种目标蛋白,总体以丙酮沉淀效果最好,其次是异丙醇和乙腈,甲醇和乙醇效果较差.该方法线性范围均达到3个数量级,定量限为0.1~2.5 nmol/L,灌浆期16种水稻叶片蛋白质含量为6.0~2818.1μg/g,相对标准偏差均小于14%.[结论]SDS可显著提高水稻叶片蛋白提取效果,采用丙酮或乙腈可获得较好的蛋白沉淀效果,但不同蛋白质略有差异.结合MRM质谱监测技术可实现水稻叶片蛋白的绝对定量,方法线性范围宽、敏度高、重复性好.

分类号： S511

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