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融合铁蛋白的猪瘟病毒囊膜蛋白E2的表达及鉴定

文献类型： 中文期刊

作者： 魏珍珍;曾振;杜梦潭;刘兴健;张志芳;胡小元;李轶女;易咏竹

作者机构：

关键词： 猪瘟病毒囊膜蛋白E2;纳米颗粒抗原;铁蛋白

期刊名称：生物技术进展

ISSN： 2095-2341

年卷期： 2020 年 NULL 卷 4 期

页码： 386-392

收录情况： 科技核心（2020版）

摘要： 目前,传统的灭活猪瘟疫苗及弱毒(减毒)猪瘟疫苗存在免疫保护期短、毒力返强等缺点,而蛋白源性亚单位疫苗可以很好的解决上述问题.铁蛋白24个亚基可以自组装成稳定的多聚体纳米颗粒,成为理想的抗原呈递载体和疫苗开发平台.基于此,将铁蛋白与具有较强免疫原性的猪瘟病毒囊膜蛋白E2(具有高保守性的保护性抗原)结合,构建融合基因E2-Fe,将该基因克隆到pET28a原核表达载体中,转化至大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导条件的探索及其高效表达,再将表达的融合蛋白进行镍柱纯化、质谱分析、Western-blotting验证及电镜检测.结果显示,融合基因E2-Fe已成功克隆到pET-28a载体上,0.50%乳糖诱导6 h为融合蛋白E2-Fe表达的最优条件;质谱分析与Western-blotting均显示融合蛋白的大小约为51 kD,与理论值相符;电镜观察到的纳米颗粒直径约为20 nm.结果表明,融合铁蛋白的猪瘟病毒囊膜蛋白E2在大肠杆菌中得到高效表达,经镍柱纯化后可获得数量可观的自组装纳米颗粒抗原,为研究新的猪瘟疫苗拓宽了研究思路.

分类号： S852.651

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