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细粒棘球蚴eg95基因的克隆以及原核融合表达

文献类型： 中文期刊

作者： 贾如;邹媛媛;李轶女;魏兆军;沈桂芳

作者机构：

关键词： 细粒棘球蚴;原核表达;酶联接免疫吸附剂测定

期刊名称：生物技术通报

ISSN： 1002-5464

年卷期： 2008 年 2008 卷 05 期

页码： 171-175

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 从青海省羊源细粒棘球蚴提取基因组DNA,PCR扩增eg95基因并且克隆。测序结果表明该基因序列全长1262bp,由2个内含子和3个外显子组成,3个外显子分别为70bp、306bp和95bp。因此,推测其ORF为471bp,编码156个氨基酸。用RT-PCR方法扩增该基因的ORF,经克隆、DNAstar比对分析序列,它与预测的ORF序列100%相同。将目的基因克隆到原核表达载体pGEX-5x-1,构建重组表达质粒pGEX-5x-1-eg95,将其转入表达菌株BL21中进行原核表达。表达产物经过SDS-PAGE电泳分析,得到一条特异的蛋白条带;质谱鉴定证明表达的蛋白确实是eg95抗原蛋白;酶联接免疫吸附剂测定表明抗原抗体发生了特异性反应,进一步证明融合蛋白进行了正确表达,从而为囊型包虫病的研究奠定基础。

分类号： Q78

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