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J亚群禽白血病Hrb-1分离株env基因克隆及gp85杆状病毒表达载体的构建

文献类型： 中文期刊

作者： 付朝阳;宋素泉;高宏雷;王笑梅;郭艳;王英;张厚双;尹训南;童光志

作者机构：

关键词： J亚群禽白血病病毒gp85基因;克隆;载体构建;杆状病毒表达系统

期刊名称：中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2004 年 26 卷 02 期

页码：

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 自哈尔滨某送检患病鸡群中分离出一株病毒,经RT＿PCR检测、SPF鸡胚成纤维细胞增殖后,获取其前病毒DNA,采用依据原型毒株HPRS＿103cDNA序列设计并合成的一对引物,PCR扩增病毒的囊膜基因,连接pMD18＿T载体并转化大肠杆菌JM109,培养后提取质粒分别用HindIII,BamHI进行单酶切和双酶切鉴定,得到了阳性重组质粒pMD18＿T＿Hrb＿1/env,对其进行PstI酶切,回收包含J亚群禽白血病病毒株Hrb＿1gp85基因的997bp片段,应用BactoBac杆状病毒表达系统,将外源片段与线性化的杆状病毒载体pFastBacHTA进行连接,获得重组载体pFASTBacHTA/gp85,将该重组载体转化DH10Bac感受态细菌,在体内进行重组,经抗性和蓝白斑筛选,获得了杆状病毒重组载体Bacmid/gp85,为表达gp85并建立适于国内应用的ELISA诊断方法奠定了基础。

分类号： S852.65

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