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稳定表达流感病毒PR8株NS1蛋白MDCK细胞系的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 张旭;滕巧泱;闫丽萍;周洁文;徐大伟;颜丕熙;姬希文;戴晓光;王洪斌;高利;李泽君

作者机构：

关键词： 流感病毒;NS1基因;MDCK

期刊名称：中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2011 年 19 卷 02 期

页码： 8-12

摘要： 根据流感病毒A/Puerto Rico/8/34株NS1基因的核苷酸序列设计引物,PCR扩增后,将NS1完整开放阅读框分别克隆于pMX载体和PET30a载体,成功构建了pMX-PR8-NS1和PET-PR8-NS1重组质粒。将PET-PR8-NS1重组质粒转化Jm109感受态大肠杆菌,诱导表达获得重组NS1蛋白免疫小鼠制备多抗血清。同时,将逆转录病毒载体系统pMX-PR8-NS1、pCI-NF-KB、PMDSV和MDSV共转染293T细胞,制备逆转录病毒样粒子。将逆转录病毒样粒子感染MDCK细胞,利用嘌呤霉素进行抗性筛选。然后经过PCR、RT-PCR、间接免疫荧光鉴定,获得稳定表达PR8病毒NS1蛋白的细胞系,将之命名为MDCK-PR8-NS1细胞系。该细胞系的建立有望为深入开展流感病毒NS蛋白生物学功能的研究以及为扩增NS1基因删除的流感病毒提供了有利的工具。

分类号： S852.659.5

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