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猪圆环病毒衣壳蛋白在昆虫细胞中表达形成病毒样颗粒的研究

文献类型： 中文期刊

作者： 李玲;李国新;徐彦召;高景鹏;周艳君;童光志

作者机构：

关键词： 猪圆环病毒;昆虫细胞表达系统;重组杆状病毒;病毒样颗粒

期刊名称：中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2011 年 19 卷 05 期

页码： 15-20

摘要： 本研究应用Bac-to-Bac杆状病毒/昆虫细胞表达系统,将猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)PCV2b的ORF2基因插入供体质粒pFastBacTMⅠPPH启动子控制下的多克隆位点,构建的质粒转化DH10BAC感受态细胞,经抗性和蓝白斑筛选,获得重组穿梭质粒rBacmid-cap。将rBacmid-cap转染对数生长期的Sf9昆虫细胞,间接免疫荧光试验证明目的蛋白在重组杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞中获得了表达。将该重组杆状病毒感染HighFiveTM细胞后,用Western blot在细胞培养上清中检测到了目的蛋白,并于d 5达到表达高峰。电镜观察结果显示上清中的目的蛋白可以装配成直径约为17 nm的病毒样颗粒。病毒样颗粒在培养上清中的大量存在,为目的蛋白进一步的分离和纯化提供了便利,也为PCV2基因工程疫苗的产业化奠定了基础。

分类号： S852.65

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