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镰形扇头蜱半饱血雌蜱cDNA文库的构建

文献类型： 中文期刊

作者： 龚海燕;周金林;周勇志;张维谊

作者机构：

关键词： 镰形扇头蜱;半饱血雌蜱;cDNA文库

期刊名称：中国人兽共患病杂志

ISSN： 1002-2694

年卷期： 2004 年 20 卷 06 期

页码： 485-488

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的 为了筛选抗蜱及蜱传疾病基因工程疫苗的抗原候选分子,构建了镰形扇头蜱半饱血雌蜱cDNA表达文库。方法 用Frizol试剂提取镰形扇头蜱半饱血雌蜱总RNA,经反转录合成cDNA第一链,应用长链PCR(LD-PCR)扩增方法,合成双链cDNA。双链cDNA(ds cDNA)在Sfi I内切酶的作用下,形成两端分别带有Sfi I A和Sfi I B的粘性末端。经CHROMA SPIN-400柱纯化,收集500bp以上的双链cDNA片段,将其连接于带有Sfi工A和Sfl I B末端的λTriplEx2噬菌体载体,经体外包装后,以XL1-Blue为受体菌构建cDNA噬菌体表达文库。结果 经测定,库容量为4.2×106,重组率为96％。扩增后的文库滴度为2.04×1010pfu/ml。通过对文库中随机挑选的15个克隆进行序列分析,获得一个编码线粒体ATP酶第6亚基蛋白的全长cDNA序列。结论 结果显示,镰形扇头蜱半饱血雌蜱cDNA表达文库已构建成功。

分类号： S852.746

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