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兰州地方分离PCV毒株ORF2阅读框的测序分析与原核表达鉴定

文献类型： 中文期刊

作者： 傅昱;郝晓芳;卢曾军;孙普;胡永浩;刘在新

作者机构：

关键词： PCV;分离鉴定;ORF2基因优化;克隆;表达

期刊名称：湖南农业科学

ISSN： 1006-060X

年卷期： 2010 年 07 期

页码： 23-27

收录情况： CSCD

摘要： 根据GenBank中发表的PCV1和PCV2的ORF2基因序列,设计合成了一对共用引物,用PCR的方法从兰州本地病料中分离出毒株,通过PK-15的增殖,扩增出ORF2序列,测序分析后发现分离毒株序列与PCV1的ORF2序列同源性达到99.1%～99.4%。根据GenBank中PCV2的ORF2序列对目的序列进行了改造、优化和合成后,目的序列和pET-32a载体连接,转化BL21(DE3)细胞后,挑取阳性克隆。对鉴定后的融合质粒用IPTG诱导,裂解液经过SDS-PAGE分析、纯化操作和Western-Bloting分析,表明改造合成ORF2序列在大肠杆菌中得到了表达,并能被PCV2阳性血清所识别。

分类号： S852.65

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