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产气荚膜梭菌α毒素-铁蛋白纳米颗粒抗原制备及其对小鼠的免疫原性评价

文献类型： 中文期刊

作者： 赵慧玉;雷伊诺;幸倩如;张珊;张广智;蒋卉;沈青春;丁家波;姜世金;范学政

作者机构：

关键词： 产气荚膜梭菌;α毒素;铁蛋白;纳米颗粒;免疫原性

期刊名称：畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2025 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 本研究旨在制备产气荚膜梭菌α毒素-铁蛋白纳米颗粒抗原并评价其对小鼠的免疫原性。将带有D56G、H68G点突变和Spytag序列的α毒素全长基因和带有SpyCatcher序列的铁蛋白（Ferritin）基因片段分别克隆至原核表达载体pET 28a，后进行表达并对表达产物进行鉴定和纯化。对纯化后的αm2ST进行细胞毒性、卵磷脂酶活性以及溶血活性分析。将纯化的αm2ST和FeSC在体外对接，随后，将α毒素-铁蛋白(αm2-Fe)对接产物和αm2ST分别与佐剂混合后免疫小鼠。免疫后每周采集小鼠血清，检测IgG、IgG亚型抗体水平和中和效价，并在二免后28 d取脾细胞分析T细胞亚群和IFN-γ分泌水平。结果显示，在28 ℃条件下，αm2ST和FeSC均以可溶性表达为主。αm2ST未被检测出细胞毒性、卵磷脂酶活性和溶血活性，这说明αm2ST已无毒性。将αm2ST和FeSC体外对接后，经SDS-PAGE、TEM和DLS分析，证实αm2-Fe形成直径32.7～50.7 nm的纳米颗粒，主峰为37.8 nm。小鼠免疫后，αm2-Fe组能产生较高水平的IgG2a抗体（P<0.001）；小鼠二免后21 d，αm2-Fe组血清中和效价为64倍，显著高于αm2ST组的32倍（P<0.05）；二免后28 d，αm2-Fe组脾细胞刺激后上清中的IFN-γ也高于αm2ST组（P<0.05），流式细胞术分析显示αm2-Fe组产生了较高比例的效应性CD8+ T细胞（P<0.001）。小鼠试验证实αm2-Fe纳米颗粒抗原能有效刺激小鼠产生体液免疫和细胞免疫。

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