数字农科院2.0

基于CRISPR/Cas9基因编辑系统建立WIP1基因g.37536832 C>A位点突变的ST细胞系

文献类型： 中文期刊

作者： 王楠;杜伟伟;王婉洁;王悦;袁茂莎;聂雨欣;孙亚茹;刘志国;吴添文;牟玉莲

作者机构：

关键词： CRISPR/Cas9;WIP1基因;ST细胞系

期刊名称：中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2025 年 05 期

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 【目的】利用CRISPR/Cas9基因编辑技术获得野生型p53诱导磷酸酶1(wild-type p53-induced phosphatase 1,WIP1)基因与精子活力显著相关的位点g.37536832 C>A突变的猪睾丸(swine testis,ST)细胞系,为在细胞层面上进一步探讨WIP1基因与公猪精液品质性状之间的关系奠定基础。【方法】利用CRISPOR在线网站在猪WIP1基因g.37536832 C>A位点附近区域设计3条向导RNA(single guide RNA,sgRNA),并将其连接至pX458-GFP载体;通过T7E1酶切试验检测3条sgRNA活性,选择效率较高的sgRNA。构建Donor载体,并将其与sgRNA载体共同转染至ST细胞,采用流式细胞术将表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的阳性细胞进行富集和单克隆细胞筛选,并对筛选出的单克隆细胞进行基因型鉴定。【结果】质粒测序结果表明,成功将3条sgRNA连接至pX458-GFP载体上;T7E1酶切结果显示,转染pX458-GFP-sgRNA1和pX458-GFP-sgRNA2质粒组产生了切割,效率分别为24%和27%,而转染pX458-GFP-sgRNA3质粒组未检测到切割,因此选择pX458-GFP-sgRNA2质粒进行试验。成功构建Donor载体,并将pX458-GFP-sgRNA2和Donor载体共转染至ST细胞。基因型鉴定结果显示,获得的269株单克隆中有205株细胞发生了基因编辑,基因编辑效率为76%,其中9株为WIP1基因g.37536832 C>A位点纯合突变的ST细胞,精确突变效率为3%。【结论】本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术成功获得了WIP1基因g.37536832 C>A位点突变的ST细胞系,为深入研究WIP1基因对公猪精液品质的影响提供了良好的细胞模型。

分类号：

  • 相关文献

[1]小鼠Wip1基因的表达及其对受精能力的影响. 邱乙卿,高倩,魏迎辉,刘莎莎,牟玉莲,李奎. 2019

[2]Wip1基因对动物繁殖及免疫的调节作用. 王悦,郑云曦,徐松松,向光明,李华,王楠,冯政,李奎,牟玉莲. 2022

[3]CRISPR/Cas9系统介导的植物基因组编辑及其应用. 王红霞,张一卉,李景娟,贺立龙,高建伟. 2018

[4]利用CRISPR/Cas9技术对燕麦乙酰辅酶A羧化酶(ACCase)基因的编辑. 于东洋,王凤梧,融晓萍,武志娟,王鑫,杨燕,韩冰,田青松. 2019

[5]CRISPR/Cas9技术在植物基因功能研究和新种质创制中的应用与展望. 周焕斌. 2016

[6]CRISPR/Cas9系统介导基因组编辑的研究进展. 刘志国. 2014

[7]利用CRISPR/Cas9技术敲除水稻Pi21基因的效率分析. 范方军,李文奇,朱金燕,王军. 2016

[8]CRISPR/Cas9介导基因组编辑技术在植物基因中的研究进展. 胡颂平,吴云花,邹国兴,聂元元,杜鹃. 2016

[9]利用CRISPR/Cas9系统敲除绵羊皮肤成纤维细胞Wnt2基因的研究. 冯新宇,袁超,郭婷婷,刘建斌,郭健,牛春娥,孙晓萍,冯瑞林,岳耀敬,杨博辉. 2018

[10]弓形虫Rop46基因敲除虫株的构建及其生长复制能力评价. 王成双,马秀英,郑君,贾洪林,王新. 2016

[11]CRISPR/Cas9技术在植物基因功能研究和新种质创制中的应用与展望. 周焕斌. 2016

[12]应用CRISPR/Cas9敲除HeLa细胞DDX21基因对新城疫病毒复制的影响. 武炜,王飒,孟春春,仇旭升,廖瑛,谭磊,宋翠萍,刘炜玮,孙英杰,丁铲. 2019

[13]CRISPR/Cas9介导的猪IPEC-J2细胞CD13基因敲除细胞系的建立. 王晓朋,徐奎,魏迎辉,张秀玲,刘莎莎,邱乙卿,刘颖,赵海全,牟玉莲,李奎. 2019

[14]水稻白叶枯病感病相关基因Xig1的分子鉴定及抗病资源创制. 郑凯丽,纪志远,郝巍,唐永超,韦叶娜,胡运高,赵开军,王春连. 2020

[15]利用CRISPR/Cas9技术编辑粒长基因GS3改善粳稻花时. 孟帅 , 徐鹏 , 张迎信 , 王宏 , 曹立勇 , 程式华 , 沈希宏 *. 2018

[16]弓形虫MORN2基因敲除株的构建及其表型鉴定. 陈凯,王金磊,白梦捷,杨文彬,黄思扬. 2018

[17]利用CRISPR/Cas9技术构建OAS2敲除的PK-15细胞系及敲除OAS2对CSFV复制的影响. 张越秀,张华伟,李连峰,仇华吉. 2019

[18]利用CRISPR/CAS9技术编辑水稻香味基因Badh2. 邵高能 , 谢黎虹 , 焦桂爱 , 魏祥进 , 圣忠华 , 唐绍清 *, 胡培松 *. 2017

[19]弓形虫Tgcsp2基因敲除株的表型和毒力. 牛美容,李法财,谢世臣,聂兰碧,朱兴全,赵光辉. 2020

[20]利用CRISPR/Cas9技术敲除TLR3基因及其影响NDV复制的研究. 邵玉乐,许曼,王辉,曾为俊,鲁国涛,赵丽丽,陈洪岩,刘建华,孟庆文. 2019

作者其他论文 更多>>