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猪源MHCⅡ类分子反式激活因子CIITA SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 朱豪杰;高飞;李丽薇;虞凌雪;张玉娇;张宽;童光志;姜一峰;李国新

作者机构：

关键词： 猪源CIITA;荧光定量PCR;SYBR GreenⅠ

期刊名称：中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2022 年 2 期

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; 科技核心（2021版） ; 农林核心（2020版）

摘要： ClassⅡTransactivator(CIITA)作为重要的MHCⅡ类分子反式激活因子在抗原递呈细胞的成熟和功能实现过程中发挥关键作用,为建立一种快速检测猪源CIITA基因的方法,本研究根据GenBank中猪源CIITA基因序列设计引物,从猪肺泡巨噬细胞的总cDNA中扩增CIITA基因,并克隆到pCold-TF载体中获得重组质粒pCold-TF-CIITA.利用重组质粒pCold-TF-CIITA作为标准品建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法.试验结果显示:该方法在1.68×101～1.68×107 copies/μL范围内呈现出良好的线性关系,检测灵敏度可达16.8 copies/μL,组内和组间变异系数均小于1％.利用该方法对不同细胞中的CIITA基因进行检测,结果显示该方法仅能够检测到猪源细胞中的CIITA基因.本试验结果表明,利用pCold-TF-CIITA作为标准品建立的CIITA基因SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可用于CIITA基因的定量检测.

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