数字农科院2.0

基于CRISPR/Cas9技术建立IGF2R基因修饰PK-15细胞

文献类型： 中文期刊

作者： 谢春嫡;郭肖蓉;张煦栋;周荣;李奎

作者机构：

关键词： CRISPR/Cas9;IGF2R基因;猪;品种改良

期刊名称：中国农业科技导报

ISSN： 1008-0864

年卷期： 2022 年 10.0 期

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; ; CSCD（2021-2022年度） ; ; 科技核心（2021版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 作为我国特色的地方种质资源,藏猪对高海拔、低氧、强紫外线辐射等恶劣环境具有良好的适应性,前期研究发现藏猪的IGF2R(insulin-like growth factor 2 receptor,IGF2R)基因在其内含子上有1段274 bp的缺失,且该缺失为藏猪独有的变异,关于IGF2R是否参与藏猪对低氧等恶劣环境的适应性调节的相关研究尚未报道.为了建立IGF2R基因274 bp修饰的猪细胞系,研究IGF2R基因对藏猪低氧耐受特性的影响,通过CRISPR/Cas9技术建立基因修饰PK-15细胞系,并通过PCR、实时荧光定量PCR(real time quantitative PCR,RT-qPCR)、蛋白免疫印迹(Western-blot)、免疫荧光(immunofluorescence,IF)等方法鉴定其分子特征,随后分别利用CCK-8和RT-qPCR、Western-blot对基因修饰细胞进行活力和凋亡基因检测.结果显示,已成功构建IGF2R基因274 bp修饰的猪细胞系,IGF2R基因表达量极显著下调(P＜0.01).基因修饰细胞活力在72 h时极显著上升(P＜0.01),并且含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(cysteinyl aspartate specific proteinase,Caspase9)和BCL-2关联X(BCL2-associated X,BAX)蛋白的水平显著下调(P＜0.05),并且B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,BCL2)基因的mRNA水平极显著上升(P＜0.01).成功构建了 IGF2R基因精确修饰的PK-15细胞系,并初步进行了功能研究,为研究IGF2R基因功能提供细胞模型,并为后续基因编辑猪的制备奠定基础.

分类号：

  • 相关文献

[1]转基因技术;猪品种改良的新希望. 徐奎,程英,周荣,牟玉莲,李奎. 2016

[2]转基因技术,猪品种改良的新希望. 徐奎,程英,周荣,牟玉莲,李奎. 2016

[3]CD163双等位基因编辑猪的制备及传代. 魏迎辉,刘志国,徐奎,Evanna Huyhn,Paul Dyce,李继良,周伟良,董树仁,冯保亮,牟玉莲,Ju LangLi,李奎. 2018

[4]CRISPR/Cas9技术及其在猪基因编辑中的应用. 刘思远,卢丹,唐中林. 2020

[5]猪CD163基因的单碱基编辑研究. 赵为民,王慧利,曹少先,郭日红,王泽平,陈哲,徐奎,付言峰,李碧侠,任守文,程金花. 2022

[6]利用CRISPR/Cas9编辑系统构建ACTA1基因敲除的PEFs细胞系. 张雪萍,刘嘉仪,王彦芳,吴添文. 2024

[7]基因编辑猪的遗传改良与生物医学应用:技术潜力与现实挑战. 王文娜,齐世宏,余大为,黄永业. 2025

[8]CRISPR/Cas9介导的CD71基因编辑IPI-2I细胞系的建立. 聂雨欣,袁茂莎,王婉洁,王楠,孙亚茹,刘志国,牟玉莲. 2025

[9]基因组编辑技术加速猪育种进程. 王佳昊,王月,吴添文,王彦芳. 2024

[10]水稻品种改良技术讲座(9)　耐逆境育种. 汤圣祥,闵绍楷. 1998

[11]水稻品种改良技术讲座(12)　种子生产和检验. 汤圣祥,闵绍楷. 1998

[12]我国的水稻生产和品种改良. 汤圣祥,闵绍楷. 1997

[13]杂交籼稻育种过程中的植株农艺性状的演变(英文). 王丹英,徐春梅,袁江,魏兴华,廖西元,章秀福. 2011

[14]我国水稻推广品种的遗传变异性和种质资源的开发利用. 郑康乐,庄杰云. 2000

[15]杂交籼稻组合演替过程中植株农艺性状的变化. 王丹英,徐春梅,袁江,魏兴华,廖西元,章秀福. 2010

[16]中国油菜品种改良的中长期发展战略. 王汉中. 2004

[17]转基因手段育种是一种科技革命. 胡定寰. 2015

[18]沙打旺品质改良育种研究报告. 李聪,苗丽宏,李蕾蕾. 2007

[19]甘肃小麦品种(系)面筋强度和糯蛋白基因分布规律研究. 杨芳萍,杨莉,郭莹,何中虎,李志虎,夏先春. 2015

[20]油菜油脂研究进展. 张垚,李云昌,梅德圣,胡琼. 2007

作者其他论文 更多>>