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羊肠道病毒TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用

文献类型： 中文期刊

作者： 马雪青;张雨星;李平花;王松泰;魏达礼;赵志荀;朵红;卢曾军;孙普

作者机构：

关键词： 羊肠道病毒;TaqMan实时荧光定量RT-PCR;诊断

期刊名称：中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2025 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 为建立一种灵敏、特异、准确的羊肠道病毒（CEV）实时荧光定量RT-PCR检测方法，本研究基于CEV基因序列的保守区设计特异性引物和探针，并制备标准品，通过优化反应体系和反应条件，建立了TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法，同时对其敏感性、特异性和重复性进行评估，并与常规RT-PCR比较检测临床样品。结果显示，所建方法的标准曲线R2为0.995，拷贝数与Ct值有良好的线性关系；该方法特异性强，与口蹄疫病毒（FMDV）、小反刍兽疫病毒（PPRV）、羊痘病毒（SPV）、羊口疮病毒（ORFV）、牛病毒性腹泻病毒（BVDV）无交叉反应；敏感性最低检测限为23 copies/μL；组内与组间变异系数均小于2.5%，重复性好。使用本方法检测了598份羊的临床样品，阳性检出率（83/598）高于常规RT-PCR（30/598）。上述结果表明，本研究建立了一种灵敏、特异的CEV TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法，并建议采用羊的粪便或肛拭子即可进行CEV的流调工作，这为CEV的诊断、流行病学调查提供了重要的技术支持。

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