文献类型： 中文期刊
作者： 崔立欣;田雅晴;郝海生;邹惠影;赵善江;庞云渭;赵学明;朱化彬;杜卫华
作者机构：
关键词： ASH1L甲基转移酶;牛卵丘细胞;H3K36甲基化修饰;凋亡
期刊名称：畜牧兽医学报
ISSN： 0366-6964
年卷期： 2020 年 51 卷 8 期
页码：
收录情况： 北大核心（2020版） ; CSCD（2020-2021年度） ; 农林核心（2020版） ; 科技核心（2020版）
摘要： 旨在探究缺失、小的、同源异形1(absent,small,or homeotic 1-like,ASH1L)甲基转移酶在牛卵丘细胞中的表达与功能.本研究通过免疫荧光染色在健康母牛卵丘细胞中对ASH1L甲基转移酶进行定位,并分析细胞的组蛋白H3第36位赖氨酸(histone H3 lysine36,H3K36)甲基化修饰模式;合成靶向Ash1L基因的siRNA,对siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3及对照组进行荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹,筛选有效siRNA;采用荧光定量PCR分析干扰A sh1L表达对处理组及对照组中凋亡相关基因及多梳抑制复合体(polycomb repressive complex 2,PRC2)组成基因的表达水平的影响.结果显示,ASH1L甲基转移酶位于牛卵丘细胞的细胞核中,呈点状分布.成功筛选到能有效干扰牛A sh1L基因的siRNA-2,其干扰效率为60% ~70%.将siRNA-2转染卵丘细胞后,该干扰组细胞中H3K36的单甲基化、二甲基化及三甲基化3种甲基化水平均显著低于对照组(P<0.05);干扰Ash1L导致凋亡相关基因Bax、Bcl-2及caspase-3表达水平显著上调,凋亡基因Bax和caspase-3表达量高于抗凋亡相关基因Bcl-2(1.311和1.179 vs 1.146);同时,干扰Ash1L基因表达也引起PRC2蛋白亚基EZH2和Suz12基因的mRNA表达量显著升高(P<0.05).综上所述,本研究探讨了ASH1L甲基转移酶在牛卵丘细胞中的表达和功能,ASH1L在牛卵丘细胞中呈点状分布,且Ash1L基因的抑制导致H3K36me1/2/3水平均显著下降及凋亡基因和PRC2蛋白相关亚基EZ H2和S uz12基因表达的升高,为进一步研究其对家畜胚胎的调控作用提供技术和理论基础.
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