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致犊牛腹泻牛源肠道聚集性大肠杆菌与奇异变形杆菌混合感染的鉴定及其部分生物学特性分析

文献类型： 中文期刊

作者： 宋玮;丁仕豪;郑晶晶;陆瑶;刘高松;张万江;夏利宁;于申业

作者机构：

关键词： 肠道聚集性大肠杆菌;奇异变形杆菌;混合感染;犊牛腹泻;药敏试验

期刊名称：中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2025 年 47 卷 6 期

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 为明确双鸭山地区某牛场致犊牛腹泻的致病菌及其生物学特性,本研究无菌采集死亡犊牛病料样品,采用PCR方法检测腹泻相关病毒,并分别经不同培养基分离细菌,对分离菌革兰染色、生化鉴定、16S rDNA基因的PCR检测与测序,采用BLAST对该基因序列比对分析。采用PCR鉴定特异性毒力基因分析分离菌的血清型,通过药敏纸片扩散法检测分离菌株的耐药性,采用Illumina二代测序技术对分离菌株全基因组测序,利用ResFinder软件预测分离菌的耐药基因,分别采用VirulenceFinder-2.0软件及根据参考文献分析分离菌的毒力相关基因,根据软件预测结果分析分离菌耐药表型与耐药基因的相关性。PCR结果显示腹泻相关病毒均为阴性；细菌分离结果显示,分离菌在麦康凯琼脂平板上的菌落呈桃红色、边缘整齐且表面光滑,在血琼脂平板上的菌落为β溶血并有腥臭味,分离的两种细菌均为革兰氏阴性,分别为两端圆滑并稍弯曲的短杆菌和球状、球杆状等多形态细菌。两株分离菌分别与大肠杆菌和奇异变形杆菌(PM)16S r DNA基因序列的相似性分别达99%以上,PCR分型结果显示分离的大肠杆菌分别扩增到1487 bp(uidA基因)及102 bp(astA基因)的目的条带,为肠道聚集性大肠杆菌(EAEC)；分离的PM扩增到225 bp的目的条带。进一步确定分离菌分别为EAEC和PM,命名为Ec2167和Pm2166株。药敏试验结果显示,菌株Ec2167对替加环素、美罗培南、庆大霉素敏感,对青霉素、磺胺甲恶唑、氨曲南、头孢曲松钠、环丙沙星耐药,且携带blaOXA、blaTEM、oqxB、oqxA、sul共5种耐药基因；菌株Pm2166对氨曲南、青霉素、头孢曲松钠、磺胺甲恶唑、环丙沙星、庆大霉素耐药,且携带aac(3)-IId、aac(6’)-Ib、blaCTX共3种耐药基因。相关性分析结果显示,两株分离菌携带多种耐药基因,二者携带的耐药基因与耐药表型基本一致。EAEC Ec2167株携带Afa、fimH、F4(K88)、iss、ompT等27种不同功能的毒力相关基因；Pm2166株携带hpmA、hpmB、rpoA、mrpA、fliL等12种不同功能的毒力相关基因。将分离菌分别单独及混合感染小鼠,通过观察各组小鼠的临床症状及统计死亡率评估分离菌株对小鼠的致病性。结果显示,感染组小鼠均出现精神萎靡、食欲不振、眼角分泌物增多等临床症状,且均出现不同程度的死亡,混合感染组小鼠的临床症状更严重；感染后不同时间,菌株Pm2166感染组小鼠的死亡率均高于菌株Ec2167单独感染组甚至全部死亡,两株分离菌混合感染组小鼠均全部死亡,且对小鼠的致病性大于两菌株单独感染组。死亡小鼠肾、脾脏、肝脏显著肿大出血,肠道广泛性出血。上述结果表明,本研究分离的EAEC和PM的耐药性均较强,且均呈多重耐药性,且均携带较多耐药基因与毒力相关基因,二者的混合感染会导致犊牛严重腹泻甚至死亡,提示环境条件致病菌如PM在犊牛腹泻中的作用应受到高度重视,并规范使用抗菌药物。本研究为犊牛腹泻的临床治疗及防控提供新思路。

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