文献类型： 中文期刊
作者： 荆扬;王玉淼;李洋;常辉;马志倩;李志伟;肖书奇
作者机构：
关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒;过表达细胞系;ORF6基因;M蛋白;MARC-145细胞
期刊名称：畜牧兽医学报
ISSN： 0366-6964
年卷期： 2024 年
页码：
收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2020版）
摘要： 为了给深入研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus， PRRSV)ORF6基因编码的M蛋白的生物学功能提供重要试验材料，本研究首先利用慢病毒包装系统构建了过表达PRRSV ORF6基因的重组慢病毒质粒，将该质粒连同辅助质粒共同转染至HEK293T细胞获得重组慢病毒；之后将重组慢病毒感染MARC-145细胞，利用嘌呤霉素结合有限稀释法进行筛选，连续筛选3轮后建立了稳定表达PRRSV M蛋白的MARC-145ORF6细胞系；并使用CCK-8试验评估过表达PRRSV M蛋白对MARC-145细胞生长的影响。利用RT-PCR、蛋白免疫印迹(Western blot)和间接免疫荧光(IFA)评估MARC-145ORF6细胞系的传代稳定性并鉴定M蛋白的亚细胞定位，进一步利用RT-qPCR评估过表达M蛋白对MARC-145细胞的干扰素及相关调节基因的影响；此外，还测定了PRRSV在MARC-145ORF6细胞系、MARC-145Flag细胞系和MARC-145细胞中的病毒滴度并绘制多步生长曲线以比较其差异。CCK-8试验结果表明过表达PRRSV M蛋白对MARC-145细胞活力无显著影响；RT-qPCR、Western blot和IFA等试验结果表明MARC-145ORF6细胞系能够表达PRRSV的M蛋白且在传代过程中稳定。此外，稳定表达PRRSV M蛋白显著下调了细胞系的Ⅰ型干扰素及其相关调节基因；多步生长曲线表明MARC-145ORF6细胞系促进PRRSV增殖，提高其病毒滴度。综上，本研究构建了可以稳定表达PRRSV M蛋白的MARC-145ORF6细胞系，发现其Ⅰ型干扰素水平显著下调且促进PRRSV复制。本研究构建的MARC-145ORF6细胞系将为M蛋白功能的深入研究提供重要生物材料。
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