牛冠状病毒N蛋白的原核表达及其单克隆抗体的制备
文献类型: 中文期刊
作者: 梁彤;曹存;王芳;姜志刚;于德斌;徐晓静;崔久辉;贾斌;尹鑫;常继涛
作者机构:
关键词: 牛冠状病毒;原核表达;N蛋白;单克隆抗体
期刊名称:中国动物传染病学报
ISSN: 1674-6422
年卷期: 2023 年
页码:
收录情况: 北大核心(2020版) ; ; 科技核心(2021版) ; ; 农林核心(2020版)
摘要: 为表达牛冠状病毒(BCoV)N蛋白并制备抗N蛋白单克隆抗体,将N蛋白表达基因克隆至原核表达载体pCold-GST,利用大肠杆菌BL21(DE3)表达出N蛋白。SDS-PAGE结果显示,N蛋白主要以可溶性形式表达,分子量约为77 kDa,亲和纯化后纯度为90%。Western blot进一步鉴定发现,重组N蛋白与全病毒多克隆抗体具有良好的反应原性。经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,以该纯化蛋白免疫Balb/c小鼠,进行融合、筛选获得3株单克隆抗体,分别命名为1D11、5C2和2B11。细胞上清单抗效价均达1∶320,3株单抗均属IgG亚类,Western blot与IFA鉴定三株单抗与真核表达的N蛋白具有特异性反应。该研究内容为进一步研究N蛋白的结构、功能及建立快速诊断BCoV方法奠定了基础。
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