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牛冠状病毒N蛋白的原核表达及其单克隆抗体的制备

文献类型： 中文期刊

作者： 梁彤;曹存;王芳;姜志刚;于德斌;徐晓静;崔久辉;贾斌;尹鑫;常继涛

作者机构：

关键词： 牛冠状病毒;原核表达;N蛋白;单克隆抗体

期刊名称：中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2023 年

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; ; 科技核心（2021版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 为表达牛冠状病毒（BCoV）N蛋白并制备抗N蛋白单克隆抗体，将N蛋白表达基因克隆至原核表达载体pCold-GST，利用大肠杆菌BL21（DE3）表达出N蛋白。SDS-PAGE结果显示，N蛋白主要以可溶性形式表达，分子量约为77 kDa，亲和纯化后纯度为90%。Western blot进一步鉴定发现，重组N蛋白与全病毒多克隆抗体具有良好的反应原性。经SDS-PAGE和Western blot鉴定后，以该纯化蛋白免疫Balb/c小鼠，进行融合、筛选获得3株单克隆抗体，分别命名为1D11、5C2和2B11。细胞上清单抗效价均达1∶320，3株单抗均属IgG亚类，Western blot与IFA鉴定三株单抗与真核表达的N蛋白具有特异性反应。该研究内容为进一步研究N蛋白的结构、功能及建立快速诊断BCoV方法奠定了基础。

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