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结核分枝杆菌复合群、副结核分枝杆菌和禽分枝杆菌禽亚种多重TaqMan荧光定量PCR方法的建立及初步应用

文献类型： 中文期刊

作者： 蔡珠明;党光辉;臧鑫鑫;邵明珠;唐阳阳;鹿萍;崔莹莹;崔子寅;刘思国

作者机构：

关键词： 结核分枝杆菌复合群;副结核分枝杆菌;禽分枝杆菌禽亚种;多重TaqMan荧光定量PCR

期刊名称：中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2023 年 1 期

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2023版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 结核分枝杆菌复合群(MTBC)、包括结核分枝杆菌(MTB)、牛分枝杆菌(MB)、非洲分枝杆菌、田鼠分枝杆菌等;非结核分枝杆菌(NTM)中禽分枝杆菌(MA)是自然界常见的动物致病菌,包含4个亚种,分别为禽分枝杆菌禽亚种(MAA)、禽分枝杆菌人/猪亚种(MAH)、禽分枝杆菌副结核亚种/副结核分枝杆菌(MAP)和禽分枝杆菌森林土壤亚种(MAS).为建立MTBC、MAP和MAA的多重荧光定量PCR检测方法,本研究基于MTBC、MAP和MAA的特异性基因devR、F57和IS901分别设计引物及探针,通过优化各反应条件,建立了一种可同时检测3种分枝杆菌的多重TaqMan荧光定量PCR方法.特异性试验结果显示,该方法对MTB、MB、MAP、MAA和MAS检测为阳性,对其他畜禽病原菌,包括MAH、13种NTM和7种非分枝杆菌检测结果均为阴性,特异性较强.敏感性试验结果显示,该方法对MB、MAP和MAA重组质粒标准品的检测限均为1.0拷贝/μL,敏感性较高;重复性试验结果显示,批内与批间重复性试验变异系数均小于2.5％,重复性较好.利用该方法检测体外模拟污染(MB、MAP和MAA菌液浓度分别为1.0×103cfu/mL～1.0x 100cfu/mL)的27份牛抗凝血和12份牛淋巴结组织样品,确定该方法对3种菌的检测限,结果显示该方法对3种菌的检测限均为1.0cfu/mL～10.0cfu/mL.将浓度为1.0×106cfu/mL的MB、MAP和MAA菌液分别单一、两两混合、三种菌混合感染BALB/c小鼠,5d后,剖杀各组小鼠并取各组织及血液样品,同时采用该方法、常规单一PCR及细菌分离培养方法检测,比较三者的检测结果.结果显示,多重荧光定量PCR方法对不同感染组小鼠的各组织样品检出率为98.1％(212/216),常规单一PCR方法的检出率为81.5％(176/216),细菌分离培养的检出率为52.8％(114/216),多重荧光定量PCR与常规单一PCR的阳性符合率均为100.0％(176/176),与细菌分离培养鉴定结果的阳性符合率均为100.0％(114/114).本研究首次建立了能够同时检测MTBC、MAP和MAA的TaqMan多重荧光定量PCR方法,其特异性强、敏感性高、重复性及稳定性好,检测性能强,可以用于临床各种样品的检测,为这3种病原的快速检测和流行病学调查提供了技术手段.

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