文献类型： 中文期刊
作者： 李晓涵;杨伏春;刘芮;高立;崔红玉;张艳萍;刘长军;祁小乐;王笑梅;高玉龙;李凯
作者机构：
关键词： 鸡传染性法氏囊病;火鸡疱疹病毒;VP2基因;生物学特性
期刊名称：畜牧兽医学报
ISSN： 0366-6964
年卷期： 2023 年
页码：
收录情况： 北大核心（2020版） ; ; CSCD（2021-2022年度） ; ; 科技核心（2021版） ; ; 农林核心（2020版）
摘要： 鸡传染性法氏囊病（IBD）是一种严重危害养禽业的高度致死性和免疫抑制性传染病。为研制IBD重组火鸡疱疹病毒（HVT）活载体疫苗，本研究构建了表达鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV）保护性抗原VP2基因的重组HVT并对其体外生物学特性进行了分析。通过RT-PCR扩增IBDV超强毒株VP2基因并克隆入pCI载体，获得重组真核表达质粒pCI-VP2。用限制性内切酶将携带CMV启动子的VP2基因表达框架切下，连接于入门质粒pENTR，构建获得重组入门质粒pENTR-VP2。将pENTR-VP2与HVT重组黏粒H3-Kan/ccdB进行LR重组反应，构建重组表达粘粒H3-VP2。用H3-VP2与其他4个相互重叠并覆盖HVT全基因组的黏粒共同转染鸡胚成纤维细胞（CEF），拯救获得重组病毒rHVT-VP2。将重组病毒在CEF中连续传至20代后用PCR、间接免疫荧光试验和免疫印迹试验进行检测，并绘制重组病毒体外生长曲线，分析其体外复制特性。结果表明，重组病毒rHVT-VP2能够稳定表达VP2蛋白，rHVT-VP2在CEF中的复制能力与亲本病毒无明显差异。重组病毒rHVT-VP2免疫鸡后能够诱导产生IBDV中和抗体，并对IBDV强毒攻击引起的死亡提供90%免疫保护。重组病毒rHVT-VP2的构建为研制IBD重组HVT活载体疫苗奠定了基础，对IBD的防控具有重要意义。
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