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采用dCas9-SunTag-DNMT3A技术调控玻璃化冷冻牛卵母细胞IVF囊胚中IGF2R基因甲基化水平

文献类型： 中文期刊

作者： 杨莎;杨宇泽;徐茜;郝海生;杜卫华;庞云渭;赵善江;邹惠影;朱化彬;赵学明

作者机构：

关键词： dCas9-SunTag-DNMT3A;玻璃化冷冻;牛;IGF2R

期刊名称：畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2022 年

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; CSCD（2021-2022年度） ; 科技核心（2021版） ; 农林核心（2020版）

摘要： 旨在探究dCas9-SunTag-DNMT3A编辑系统对玻璃化冷冻牛卵母细胞IVF囊胚中IGF2R基因甲基化水平及胚胎发育能力的影响，为冷冻卵母细胞/胚胎特定位点DNA甲基化的精确调控奠定基础。本研究将经过体外成熟的牛卵母细胞进行玻璃化冷冻，随后进行体外受精，将受精所得到的原核胚进行dCas9-SunTag-DNMT3A编辑系统的注射，统计并计算卵母细胞的发育情况；通过亚硫酸盐测序的方式检测IGF2R基因启动子甲基化水平，并利用荧光定量PCR检测IGF2R及相关基因的表达水平。与冷冻组相比，注射不同浓度的dCas9-SunTag-DNMT3A编辑系统后，只有40ng·μL-1组成功地提高了玻璃化冷冻卵母细胞IVF后的发育能力（P＜0.05），20和60ng·μL-1组差异不显著（P＞0.05），但40ng·μL-1组发育效果仍然显著低于新鲜对照组（P＜0.05）；对检测冷冻组、新鲜组、40ng·μL-1组IGF2R基因启动子甲基化水平分析发现，40ng·μL-1组水平与新鲜组相似，显著高于冷冻组（P＜0.05）；荧光定量试验结果显示，40ng·μL-1组IGF2R 基因mRNA表达水平相较于冷冻组显著降低（P＜0.05），与新鲜组相似。注射40 ng·μL-1 的dCas9-SunTag-DNMT3A甲基化编辑系统，能够通过有效升高IGF2R基因启动子甲基化水平（P＜0.05）及显著降低其mRNA表达水平（P＜0.05），来正向调节玻璃化冷冻卵母细胞IVF胚胎的发育情况，提高胚胎发育能力，使得其卵裂率和囊胚率都得到显著提高（P＜0.05），同时促进胚胎发育相关基因的表达。

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