数字农科院2.0

基于非洲猪瘟病毒E199L蛋白间接ELISA方法的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 范婷婷;何希君;张险峰

作者机构：

关键词： 非洲猪瘟;E199L;原核表达;间接ELISA

期刊名称：中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2022 年 44 卷 1 期

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; CSCD（2021-2022年度） ; 科技核心（2021版） ; 农林核心（2020版）

摘要： 为建立非洲猪瘟病毒(ASFV)间接ELISA抗体的检测方法,本研究从ASFV Pig/HLJ/2018株基因组中经PCR扩增E199L基因序列,将其克隆至p ET-32a(+)原核表达载体进行表达并纯化,表达的蛋白经SDS-PAGE和western blot鉴定后,用纯化的重组E199L蛋白(rE199L)作为包被抗原,利用矩阵法优化各反应条件,建立了检测ASFV E199L蛋白抗体的间接ELISA方法,并检测了该方法的特异性、敏感性和重复性。利用该方法及进口商品化试剂盒对196份猪临床血清样品进行检测,计算二者的符合率。SDS-PAGE及western blot结果显示,正确表达并纯化了rE199L,且rE199L具有良好的反应原性。间接ELISA方法反应条件的优化结果为:rE199L最佳包被浓度为4μg/mL；最佳血清稀释度1:100,37℃作用45 min；5%脱脂乳37℃封闭60 min；兔抗猪HRP-IgG最佳稀释度为1:10000,37℃孵育60 min。建立的该方法除了对ASFV阳性猪血清检测结果为阳性外,对PRRSV、PEDV、CSFV、PCV、PPV和PRV阳性猪血清均为阴性结果；敏感性试验结果显示,该方法可检测阳性血清的最大倍数为1:1600；批内、批间重复性试验的变异系数均小于10%。196份临床猪血清样品的检测结果显示,该间接ELISA方法的阳性检出率为89.3%(175/196),阴性样品检出率为10.7%(21/196)；商品化试剂盒的阳性检出率为90.8%(178/196),阴性样品检出率为9.2%(18/196)。二者的符合率为98.3%。建立的该方法特异性强、敏感性高、重复性好,可以满足临床检测和实验评价的需求,为ASFV抗体检测提供更多的方法选择。

分类号：

  • 相关文献

[1]基于非洲猪瘟病毒pA104R蛋白的间接ELISA检测方法的建立与应用. 王兆贵,赵亚茹,杨吉飞,牛庆丽,刘银光,敬梦瑶,杨赛霞,吕欣倩,刘猛,姚永海,关贵全,刘志杰,殷宏. 2021

[2]非洲猪瘟病毒DP71L蛋白原核表达及其多克隆抗体制备. 李志煜,马旭升,马永华,郑海学. 2024

[3]非洲猪瘟病毒pE199L蛋白在大肠杆菌中的表达及免疫原性分析. 张亮,张越,安芳兰,杨进才. 2025

[4]非洲猪瘟病毒p30蛋白表达与单克隆抗体制备. 孟鑫,李松楠,王安铖,闫婉婉,李俊波,陈玲超,童武,孔宁,单同领,于海,童光志,邢明伟,郑浩. 2024

[5]猪囊尾蚴TS-CC18蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立. 张少华,骆学农,贾万忠,郭爱疆,景志忠,才学鹏. 2009

[6]水貂肠炎病毒VP2基因的原核表达及间接ELISA方法的建立. 陈涛,赵建军,张海玲,柴秀丽,闫喜军,吴威,钱爱东. 2009

[7]蓝舌病病毒VP5蛋白的原核表达及其抗原性分析. 赵大维,朱彦青,陈伟业,胡倩倩,殷倩倩,黄克和,步志高. 2012

[8]猪细小病毒VP2蛋白主要抗原表位区的原核表达及检测PPV抗体的间接ELISA的建立. 范朋举,曹轶梅,卢曾军,张萌,孙普,付元芳,李平花,白兴文,包慧芳,陈应理,李冬,刘在新. 2014

[9]犬细小病毒JS12株VP2基因的分子特征及其在大肠杆菌中的表达. 王永山,毕振威,夏兴霞,欧阳伟. 2013

[10]原核表达山羊布氏杆菌M5-90VirB12蛋白及其在检测中的初步应用. 高宇哲,胡森,乔祖健,刘林涛,杨帆,步志高. 2011

[11]小反刍兽疫病毒H和F蛋白多抗原表位的表达及其反应原性. 石晓妮,窦永喜,张海瑞,翟军军,蒙学莲. 2011

[12]犬细小病毒VP2基因的原核表达及间接ELISA方法的建立. 李慕瑶,姜骞,刘家森,司昌德,韩凌霞,曲连东. 2007

[13]家畜布鲁氏菌外膜蛋白OMP25基因的原核表达及其应用. 臧金凤,陈妍,吴锦艳,王光祥,尹双辉,栾志舫,曹小安,尚佑军,张志东,刘湘涛,张超. 2016

[14]猪戊型肝炎病毒基因ORF2片段AG02的融合表达及间接ELISA方法的初步建立. 张可心,赵敏,郭巍,于敏,赵宇军,相文华. 2006

[15]狂犬病病毒P基因的原核表达及间接ELISA方法的应用. 赵刚,李刚,陈铁桥,范晓娟. 2010

[16]基于狂犬病病毒重组蛋白的ELISA检测方法比较研究. 程朝飞,宫苗苗,田康乐,王勇,赵占中,史利军,李刚. 2012

[17]隐孢子虫P23基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立. 张国恩,米荣升,苏庆美,黄燕,周鹏,胡义彬,秦培兰,呼高伟,陈兆国. 2011

[18]口蹄疫病毒2C3AB基因的原核表达及ELISA方法的建立. 王幸,周国辉,刘云,于力. 2012

[19]基于血清4型禽腺病毒Fiber-2间接ELISA方法的建立. 梅楠,孙海伟,李允章,汪凯,王桂军,陈鸿军. 2019

[20]非洲猪瘟病毒p30基因的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立. 吴竞,王西西,吴映彤,任肖,郭晓宇. 2018

作者其他论文 更多>>