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禽腺病毒血清4型实时荧光RAA检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 张宗淑;李会会;陈曦;李静;张子闯;时国强;翟向和;王春光;张铁

作者机构：

关键词： 禽腺病毒血清4型;心包积液-肝炎综合征;重组酶介导等温核酸扩增;荧光探针;六邻体基因

期刊名称：黑龙江畜牧兽医

ISSN： 1004-7034

年卷期： 2024 年 20 期

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 为了快速准确地诊断禽心包积液-肝炎综合征(hydropericardium-hepatitis syndrome,HHS),试验根据禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus serotype-4,FAdV-4)的六邻体(Hexon)基因保守序列设计特异性引物和探针,将重组酶介导等温核酸扩增技术(recombinase-aided amplification,RAA)与荧光探针结合,通过对反应条件(温度和时间)进化优化建立一种用于检测FAdV-4的实时荧光RAA方法,对该方法进行特异性、敏感性、重复性试验,并分别采用该方法、普通PCR方法和实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RFQ-PCR)方法检测56份鸡肝脏样本,并计算该方法与其他两种方法的符合率。结果表明:建立的实时荧光RAA方法在40℃条件下反应15 min即可完成检测；仅可检测出FAdV-4,与禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)、新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)、传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)、传染性喉气管炎病毒(Infectious laryngotracheitis virus,ILTV)、鸡贫血病毒(Chicken anemia virus,CAV)和传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)均无交叉反应,特异性较强；对FAdV-4的最低检测限为1×10~1拷贝/μL,是普通PCR方法的100倍,与RFQ-PCR方法相当,敏感性较高；重复性试验中的组内重复性试验和组间重复性试验的变异系数(coefficient of variation,CV)均小于10%,重复性良好；对56份临床样品进行检测,该方法与RFQ-PCR方法和普通PCR方法的符合率分别为100%、96.43%。说明成功建立了FAdV-4的实时荧光RAA检测方法,该方法操作简便、快速,特异性较强,敏感性较高,重复性良好,可用于HHS的早期诊断。

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