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犬副流感病毒F基因原核表达及多克隆抗体的制备

文献类型： 中文期刊

作者： 刘禹含;叶雨濛;麦嘉迅;程松;孟春春;朱杰;刘光清;王勇;巴音查汗·盖力克;李传峰

作者机构：

关键词： 犬副流感病毒;F基因;原核表达;多克隆抗体

期刊名称：中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2023 年

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; ; 科技核心（2023版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 本研究利用原核表达系统表达犬副流感病毒（CPIV）F蛋白，并制备CPIV-F蛋白多克隆抗体。依据CPIV SH2021株F基因设计引物，扩增获得去除信号肽的F基因片段，并构建了重组表达质粒pET-42a-CPIV-F，经测序验证正确后转化至大肠杆菌BL21中，经IPTG诱导表达重组蛋白，并优化了诱导剂浓度及诱导时间。采用包涵体粗纯化法对重组CPIV-F蛋白进行纯化，并测定了重组蛋白浓度。用纯化的重组CPIV-F蛋白制备其兔源多克隆抗体，通过Western blot和ELISA鉴定了多克隆抗体特异性和效价。结果显示，试验成功构建pET-42a-CPIV-F原核表达质粒并表达出重组CPIV-F蛋白。SDS-PAGE法和Western blot结果表明，重组CPIV-F蛋白可在大肠杆菌中的表达，大小约为89kDa。优化后的IPTG终浓度为1 mmol/L，诱导4h表达量最大，重组蛋白浓度为2.3 mg/mL。Western blot结果表明兔抗CPIV-F抗体可以与重组蛋白发生特异性反应。间接ELISA测得兔抗CPIV-F蛋白多克隆抗体效价为1:102 400。本研究制备的兔源多克隆抗体特异和高效，表明F蛋白具有良好的免疫原性，为进一步研究CPIV F蛋白的生物学功能及建立相关的免疫学检测方法奠定了基础。

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