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猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白的原核表达及其间接ELISA方法的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 陈荣琳;严杰聪;朱世强;王帅勇;王娟;高硕磊;邢燕茹;刘清艳;祝宇翔;李健楠;周艳君;单同领;童武;郑浩;刘长龙;姜一峰;孔宁;童光志;于海

作者机构：

关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒;N蛋白;表达纯化;ELISA

期刊名称：中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2024 年

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收录情况： 北大核心（2023版） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）核衣壳蛋白（N蛋白）由ORF7编码，能够最早诱导宿主产生抗体，在PRRSV血清学诊断中具有重要价值。本研究通过RT-PCR 方法扩增HuN4-F112的ORF7基因，并将其克隆至原核表达载体pCold-I中，成功获得重组质粒pCold-I-N。将重组质粒转化至感受态细胞BL21中进行IPTG诱导N蛋白的表达，利用SDS-PAGE、间接免疫荧光试验以及Western Blot检测N蛋白的表达及其免疫原性。应用重组N蛋白作为抗原，优化各反应最佳条件建立针对PRRSV N蛋白抗体的间接ELISA方法。最适抗原包被浓度为300 ng/孔，最适包被条件为37℃1h后4℃过夜，最佳血清稀释度为1: 80，最佳封闭条件为5%脱脂乳37℃1 h；N-ELISA方法与IDEXX ELISA试剂盒检测结果总符合率为96.25%，其中阴性符合率为100%。本研究建立的PRRSV N蛋白抗体间接ELISA检测方法，具有良好的特异性和重复性，为监测PRRSV流行情况提供快速、高效的方法。

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