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猪急性腹泻综合征冠状病毒核衣壳蛋白单克隆抗体的制备及其抗体序列的分析

文献类型： 中文期刊

作者： 曹丽艳;孔祥雨;李想通;索学鹏;段月月;袁聪;施磊;张宇;马国祥;郑海学;王琦

作者机构：

关键词： 猪急性腹泻综合征冠状病毒;N蛋白;单克隆抗体;抗体序列分析

期刊名称：畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2023 年

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2023版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 猪急性腹泻综合征冠状病毒（swine acute diarrhea syndrome coronavirus， SADS-CoV）目前尚未有商品化诊断试剂盒，为填补行业空白，本研究制备了抗SADS-CoV核衣壳（N）蛋白单克隆抗体并对其序列进行了分析。利用原核表达系统表达SADS-CoV N蛋白并进行纯化，纯化的N蛋白作为免疫源免疫BALB/c小鼠，通过细胞融合、筛选及亚克隆，获得5株能够稳定分泌抗SADS-CoV N蛋白的杂交瘤细胞株，将其命名为1C10、4B10、6G1、6F3和6E8；此外，利用套式PCR扩增技术获得了抗体可变区基因序列。间接免疫荧光试验（IFA）结果表明，5株单抗特异性识别Huh7细胞感染的SADS-CoV。ELISA结果表明，5株单抗与纯化的SADS-CoV N蛋白具有良好的反应性，但是，与SADS-CoV反应性分析发现，只有6E8的反应性较好，其余四株均不反应。Western blot结果表明，5株单抗均能特异性识别纯化的以及SADS-CoV感染表达的N蛋白。亚类分型鉴定结果表明，1C10、4B10、6G1和6F3重链为IgG1型，6E8为IgG2a型，它们的轻链为Kappa型。截短表达分析表明，5株单抗识别N蛋白的区域为1—142 aa。总之，本研究制备的抗SADS-CoV N蛋白单克隆抗体为SADS-CoV新型诊断方法的开发以及SADS-CoV N蛋白功能及结构的研究提供了有用的工具。

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