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新型GH45家族纤维素酶的智能挖掘及其在里氏木霉中的高效表达

文献类型： 中文期刊

作者： 王瑾;白静;赵晶;田健;张伟;王苑;杨浩萌;石美杉;张贝贝;徐欣欣;黄火清

作者机构：

关键词： 纤维素酶;GH45;里氏木霉;高效表达

期刊名称：生物技术进展

ISSN： 2095-2341

年卷期： 2025 年

页码：

收录情况： 科技核心（2024版）

摘要： 利用生物信息学方法和蛋白性质预测模型挖掘新型GH45家族纤维素酶，实现其在里氏木霉中的高效表达，以期为畜牧饲料加工提供新的酶源。通过Preoptem蛋白模型预测工具结合公共数据库Uniparc，筛选得到Thielaviopsis punctulate来源的GH45家族纤维素酶TpCel45A。将其编码基因进行合成后构建表达载体，通过原生质体转化里氏木霉菌株，表达纯化获得重组TpCel45A蛋白并进行酶学性质测定。结果显示，重组TpCel45A的最适温度为55℃，最适pH为5.5，并展现出良好的热稳定性，80℃处理15 min后仍保持84%以上的酶活。重组TpCel45A具有宽泛的pH稳定性，在pH 4.0～9.0范围内处理1 h后剩余酶活力达52%以上。动力学参数测定显示，TpCel45A的Km为8.04 mg·mL-1,Vmax为19.04 mg·mL-1·min-1。kcat为377.1 s-1，催化效率kcat/Km值为46.9。TpCel45A的挖掘、鉴定及异源表达为纤维素酶的工业应用提供了新的酶源。此外，TpCel45A优异的热稳定性和pH稳定性使其在高温制粒工艺和不同pH条件下具有良好的应用潜力，尤其在饲料加工和生物质转化利用等领域具有重要的应用价值。

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