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奶牛乳房炎三种主要链球菌多重PCR检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 叶方钰;刘爽;王权;戚雪芹;张传印;谢雨芮;潘翠玲;蒋蔚

作者机构：

关键词： 奶牛乳房炎;无乳链球菌;停乳链球菌;乳房链球菌;多重PCR

期刊名称：中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2022 年

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; ; CSCD（2021-2022年度） ; ; 科技核心（2021版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 链球菌是引起奶牛乳房炎的重要病原菌，其中无乳链球菌（S.agalactiae）、停乳链球菌（S.dysgalactiae）和乳房链球菌（S.uberis）是奶牛乳房炎主要的致病性链球菌。为同时、快速地检测牛奶样品中这3种重要链球菌，本研究根据无乳链球菌sip基因、停乳链球菌Mig基因及乳房链球菌pauA基因设计特异性引物，同时以细菌16S rRNA基因为内参，建立了多重PCR检测方法，并进行条件优化。结果显示，该方法最佳退火温度为58℃，最佳扩增循环数为25个循环，本方法同时检测无乳链球菌、停乳链球菌及乳房链球菌时，检测限分别为1×103 CFU/mL、1×103 CFU/mL及1×104 CFU/mL，灵敏性高。该方法对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯氏菌、单核细胞增生李斯特等10种菌均无交叉反应，特异性好。模拟样品结果显示，当奶样中3种菌的初始浓度均为1 CFU/mL时，37℃增菌6 h即可检出乳房链球菌，增菌8 h以上三种菌可全部检出。结果表明，该多重PCR检测方法具有较好的特异性和灵敏性，对同时快速检测牛奶中无乳链球菌、停乳链球菌及乳房链球菌具有重要意义，也为奶牛乳房炎的监管、诊治提供了技术支持。

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