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表达红色荧光蛋白报告基因的重组新城疫病毒的构建及其生物学特性鉴定

文献类型： 中文期刊

作者： 张萍;侯岳池;赵玲;赵飞杨;王菁;陈礼斌;孙英杰;丁铲;任涛

作者机构：

关键词： 新城疫病毒;反向遗传技术;mCherry;DsRed

期刊名称：中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2025 年

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收录情况： 北大核心（2023版） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 本研究以新城疫病毒（NDV）强毒株Herts/33为骨架，采用反向遗传学技术将红色荧光蛋白mCherry或DsRed编码序列精准插入P与M基因之间的非编码区，成功拯救rHerts/33-mCherry与rHerts/33-DsRed两株重组病毒。系统比较显示，rHerts/33-mCherry株在荧光亮度、信噪比及表达效率方面显著优于rHerts/33-DsRed株，遂确立为后续研究对象。连续10代SPF鸡胚传代显示，rHerts/33-mCherry血凝效价稳定在7log?，TCID??(10?7.5/0.1mL)与野生型无差异，Westernblot与间接免疫荧光证实NP及mCherry 同步稳定表达，遗传和表型稳定。功能分析表明，重组病毒诱导IFN-β、TNF-α、IL-6和IL-8等炎症因子表达及NF-κB/IFN信号激活水平与亲本病毒一致。Annexin V/PI流式检测显示，二者诱导HeLa细胞凋亡能力相当。Fluo-4 AM实时成像进一步证实NDV感染特异性升高胞内Ca2?仅见于mCherry阳性细胞。综上，rHerts/33-mCherry兼具野生型复制能力与溶瘤潜能，且可实现病毒入侵、复制、传播全过程的实时可视化，为解析NDV致病机制及开发抗病毒药物与溶瘤制剂提供了可靠工具。

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