文献类型： 中文期刊
作者： 王静蕊;刘彦峰;欧晓晴;廖瑛;仇旭升;谭磊;宋翠萍;丁铲;孙英杰
作者机构：
关键词： 新城疫病毒;Amisyn;SNARE蛋白家族;多克隆抗体;CRISPR/Cas9;病毒复制
期刊名称：中国动物传染病学报
ISSN： 1674-6422
年卷期： 2025 年
页码：
收录情况： 北大核心（2023版） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）
摘要： 新城疫病毒（NDV）是严重威胁全球养禽业的重要病原，其复制调控机制尚不完全清楚。Amisyn属于SNARE家族v?SNARE类型蛋白，参与膜融合和自噬过程，但其在禽类病毒感染中的功能尚未报道。本研究旨在探讨鸡源Amisyn在NDV感染过程中的作用。本研究基于鸡源Amisyn基因构建pET?28a?Amisyn原核表达质粒，经优化条件成功诱导表达并纯化蛋白，免疫小鼠制备了特异性较高的多克隆抗体。随后，利用CRISPR/Cas9系统在鸡成纤维细胞DF?1中敲除Amisyn并获得纯合单克隆细胞系。通过制备的鸡源Amisyn多克隆抗体进行Western blot检测及测序分析，结果确认该细胞系中Amisyn蛋白完全缺失。基于成功构建的鸡源Amisyn抗体及单克隆敲除细胞系，进一步评估Amisyn对NDV复制的影响。实验结果表明，Amisyn缺失显著降低了NDV核衣壳蛋白（NP）表达水平和病毒滴度，提示Amisyn在NDV复制过程中具有促进作用，尤其可能参与病毒生命周期早期的调控。综合分析推测，Amisyn可能通过调节病毒与宿主膜融合效率及自噬过程影响NDV生命周期。本研究为深入解析Amisyn的病毒学功能及其作为新型防控靶点的应用潜力奠定了基础。
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