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非洲马瘟病毒重组VP7蛋白在大肠杆菌中的表达及多克隆抗体的制备与鉴定

文献类型： 中文期刊

作者： 王轩莹;户鑫兵;罗昭依;田占成;高闪电;殷宏;罗建勋;关贵全;苟惠天;独军政

作者机构：

关键词： 非洲马瘟病毒;VP7蛋白;原核表达;多克隆抗体;免疫荧光

期刊名称：中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2023 年

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2023版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 非洲马瘟是由非洲马瘟病毒感染马引起的一种以发热、皮下和肺组织水肿及内脏出血为主要特征的烈性传染病。本研究首先通过PCR以合成的AHSV S7基因为模板扩增得到开放阅读框片段，将其克隆至大肠杆菌表达载体pPROEX HTb，成功构建重组质粒pPROEX-AHSVS7。转化重组质粒pPROEX-AHSVS7到大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中，用0.5 mmol/L IPTG进行诱导表达，通过SDS-PAGE和免疫印迹（Western-blot）对表达产物进行鉴定。采用包涵体和亲和层析纯化的方法对表达产物进行纯化，获得纯度较高的重组VP7蛋白，经3次免疫新西兰大白兔收集血清并进行抗体纯化，通过Western-blot、免疫荧光和间接ELISA法进行抗体的鉴定。结果表明，本试验利用大肠杆菌系统成功诱导表达了约为40 ku的重组AHSV VP7蛋白，并成功制备出特异的VP7多克隆抗体。以上结果为进一步研究VP7蛋白的生物学功能、建立诊断方法及亚单位疫苗研发提供了基础。

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