文献类型： 中文期刊
作者： 王国超;赵亚茹;张忠辉;张玉龙;白鸽;耿抒贤;樊洁;杨吉飞;关贵全;殷宏;罗建勋;牛庆丽
作者机构：
关键词： 非洲猪瘟病毒;pD205R蛋白;原核表达;多克隆抗体
期刊名称：畜牧兽医学报
ISSN： 0366-6964
年卷期： 2023 年
页码：
收录情况： 北大核心（2020版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2023版） ; ; 农林核心（2020版）
摘要： 非洲猪瘟病毒（African Swine Fever Virus， ASFV）pD205R蛋白参与病毒基因的转录，属于ASFV RNA聚合酶，且与真核生物RNA聚合酶II RPB5亚基相似，为深入了解pD205R结构，功能及病毒与宿主之间的作用机制。利用DNAStar、MEGA7.0对GenBank中公布的不同毒株的ASFVD205R基因序列进行分析，利用ExPASy、GOR4、AlphaFold软件对该蛋白的理化性质及结构预测进行分析，并对其原核表达和制备抗pD205R蛋白多克隆抗体。结果显示：在不同基因型间D205R基因高度保守；利用ExPASy在线软件预测pD205R蛋白理化性质其分子式为C1088H1712N278O295S8，属亲水性蛋白，稳定性差；二级结构及三级结构预测显示α螺旋是其主要结构形式，占比为35.12%；同时以ASFV-CN/SC/2019毒株基因组为模板，构建原核表达质粒pET-28a-D205R并转入Rosetta （DE3）感受态细胞，经IPTG诱导重组蛋白成功表达，大小为23.3 ku。获得的蛋白经镍柱亲和层析纯化，Western blot鉴定可与ASFV阳性血清发生特异性反应。免疫新西兰大白兔制备的多克隆抗体效价达到1∶51 200，Western blot和IFA结果显示制备的多克隆抗体够特异性的识别ASFV感染的猪肺泡巨噬细胞中表达的天然pD205R蛋白，为进一步研究D205R基因的功能及其在宿主与病毒互作中的作用奠定了基础。
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