文献类型： 中文期刊
作者： 户鑫兵;王轩莹;宋昱庆;田占成;关贵全;苟惠天;罗建勋;殷宏;独军政
作者机构：
关键词： 非洲马瘟病毒;AHSV NS1蛋白;昆虫细胞表达;抗原性
期刊名称：中国兽医科学
ISSN： 1673-4696
年卷期： 2024 年
页码：
收录情况： 北大核心（2020版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2023版） ; ; 农林核心（2020版）
摘要： 非洲马瘟(African horse sickness，AHS)是一种由媒介昆虫传播感染马属动物的病毒性疾病，为了在杆状病毒表达系统中表达AHSV NS1蛋白并评估其作为亚单位疫苗组分的抗原性，本研究参考GenBank上公布的AHSV基因序列，人工合成NS1全长基因序列，利用PCR方法扩增完整的开放阅读框后将其克隆到转座载体pFastBacTMHTb上，将成功构建的重组质粒pFastBac-AHSVNS1转化到DH10Bac感受态细胞中，获得了含有AHSV NS1基因的重组杆粒Bacmid-AHSVNS1，将其转染到Sf9昆虫细胞内获得了表达AHSV NS1蛋白的重组杆状病毒。SDS-PAGE和Western-blot结果显示，表达的重组AHSV NS1蛋白大小为65 ku，且获得了纯化的重组AHSV NS1蛋白。将其免疫BALB/c小鼠，细胞免疫荧光和Western-blot试验显示获得了特异性的抗AHSV NS1蛋白多克隆抗体，其效价达1∶51200。流式细胞分析显示，AHSV NS1蛋白免疫小鼠能够刺激CD4+和CD8+T淋巴细胞的增加。上述研究结果表明，AHSV NS1蛋白作为AHSV亚单位疫苗的组成成分具有一定应用前景。本试验实现了AHSV NS1蛋白在昆虫细胞中成功表达并验证其具有良好的抗原性，这为进一步研究AHSV NS1蛋白的生物学功能和亚单位疫苗开发奠定了基础。
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