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环形泰勒虫转化细胞表达外源基因系统的构建

文献类型： 中文期刊

作者： 刘培琪;赵帅阳;罗金;姚佳丽;殷宏;关贵全

作者机构：

关键词： 环形泰勒虫;转化细胞;体外转录;脂质体转染

期刊名称：中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2025 年

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收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 环形泰勒虫转化细胞目前存在转染难、转染效率低的问题，极大阻碍了虫体蛋白诱导细胞转化的机制研究。为提高环形泰勒虫转化细胞的转染效率，本研究以环形泰勒虫转化细胞TaNM1为研究对象，通过体外转录（IVT）技术将编码增强绿色荧光蛋白（eGFP）的RNA，经加帽后获得eGFP mRNA，利用脂质体转染至TaNM1细胞，同时分别设置空白组作为阴性对照，脂质体和电转染p-eGFP质粒组作为阳性对照组，最后通过Western-blot、荧光显微镜观察以及流式细胞术检测eGFP蛋白在TaNM1细胞中的表达情况。结果显示：利用脂质体转染eGFP mRNA至TaNM1细胞中，可以观察到eGFP绿色荧光，Western-blot同时检测到eGFP蛋白的表达（27 kDa），流式细胞术检测其转染效率可以达到66.22%；利用脂质体转染p-eGFP质粒和电转染p-eGFP质粒均不能在TaNM1细胞诱导表达eGFP，且电转染会引起细胞大量死亡。结论，本研究成功建立了高效的体外转录系统，为深入研究环形泰勒虫感染与致病机制提供了技术支撑。

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