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羊口疮病毒ORF112基因缺失毒株的构建及增殖能力分析

文献类型： 中文期刊

作者： 尤婷;任善会;王萌;张红强;高小龙;姚威;王卉;杨雪;马春玲;柳民意;张玉哲;王金龙;孙跃峰;陈豪泰;王桂荣

作者机构：

关键词： 羊口疮病毒;112基因;同源重组;基因缺失

期刊名称：畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2024 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 利用同源重组技术构建羊口疮病毒（orf virus， ORFV）ORF112基因缺失毒株，为后续研制出高效、安全的ORFV基因工程疫苗提供候选毒株。以ORF112基因为靶基因，通过重叠PCR的方法将左、右同源臂及绿色荧光蛋白（EGFP）基因表达框，进行融合后与pUC19T载体连接，构建出pUC19T-ORFV-ΔORF112-EGFP基因转移载体。将转移载体重组质粒转染到Vero细胞与WT-ORFV基因组进行同源重组。采取有限稀释法和挑取单细胞克隆法，筛选并纯化出纯合的ORFV-ΔORF112-EGFP毒株，并对该基因缺失毒株遗传稳定性和增殖特性等进行研究。结果显示：利用有限稀释和挑取单细胞克隆方法，进行阳性重组病毒纯化，通过PCR验证和测序，成功的获得ORFV-ΔORF112-EGFP重组毒株。该重组毒株在系列传代过程中EGFP稳定表达且无减弱现象。该重组ORFV-ΔORF112-EGFP毒株与野生毒株的复制生长特性基本一致。成功构建并筛选得到纯化的ORFV-ΔORF112-EGFP基因缺失毒株，该毒株具有良好的遗传稳定性和复制能力，为后续ORFV基因工程疫苗的研制提供了候选毒株。

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