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鸡NLRP3蛋白表达、多克隆抗体制备与初步应用

文献类型： 中文期刊

作者： 许萌萌;黄萌萌;王国栋;于航博;韩京哲;牛鑫鑫;张玉龙;韩金泽;刘润杭;吴子文;于晓雪;王笑梅;高玉龙;李留安;祁小乐

作者机构：

关键词： NLRP3;原核表达;多克隆抗体;炎症检测

期刊名称：中国动物检疫

ISSN： 1005-944X

年卷期： 2024 年 41 卷 7 期

页码：

收录情况： 农林核心（2020版）

摘要： 为探究禽病病原触发炎症的分子机制,通过克隆和分析鸡源NLRP3基因,原核表达和纯化了NLRP3蛋白,随后用纯化的NLRP3蛋白免疫小鼠制备了NLRP3多克隆抗体,对该抗体进行了ELISA效价检测,并初步测试了该抗体在间接免疫荧光试验(IFA)和Westerm blot试验中的应用效果。结果显示:成功表达重组蛋白NLRP3,其相对分子质量约87kDa,能与His标签抗体发生特异性结合反应；成功制备鸡NLRP3蛋白多克隆抗体,其ELISA效价高达1:32000；Western blot和IFA检测中,NLRP3多克隆抗体可与NLRP3原核表达蛋白和真核表达蛋白发生特异性反应,还可检测到由IBDV触发的以及LPS刺激产生的巨噬细胞HD11内源性NLRP3蛋白的上调表达。结果表明,制备的鸡NLRP3蛋白多克隆抗体免疫原性较好、效价较高。本试验为进一步研究禽病病原诱发炎症的分子机制提供了重要工具。

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