基于novel-miR1检测家兔豆状囊尾蚴感染的滚环扩增方法的建立和应用
文献类型: 中文期刊
作者: 陈国梁;王立群;李艳萍;刘婷丽;李红;张少华;骆学农;强文军
作者机构:
关键词: 豆状囊尾蚴病;novel-miR1;滚环扩增
期刊名称:中国寄生虫学与寄生虫病杂志
ISSN: 1000-7423
年卷期: 2023 年
页码:
收录情况: 北大核心(2020版) ; ; CSCD(2023-2024年度) ; ; 科技核心(2023版)
摘要: 目的 建立检测家兔豆状囊尾蚴感染的滚环扩增(RCA)方法。方法 以家兔血清中豆状囊尾蚴来源的novel-miR1为诊断靶标,设计连接序列和锁式探针,并对连接序列和锁式探针的比例、反应时间、酶用量、 dNTP用量以及扩增反应时间等5个重要条件进行优化,建立检测豆状囊尾蚴感染的RCA方法。将novel-miR1标准品倍比稀释为1 fmol/L至100 nmol/L的9个不同浓度的样品,评价RCA方法的灵敏度。用优化后的RCA方法分别检测健康家兔和豆状囊尾蚴感染家兔血清miRNA各20份(实验室保存样品),并通过受试者工作特征(ROC)曲线分析其敏感性和特异性。20只雌性家兔每只家兔经口感染1 000个豆状带绦虫虫卵,采集感染前和感染后每个月的家兔血样制备血清miRNA,用优化后的RCA方法进行检测,评价其应用效果。结果电泳结果显示,RCA扩增产物的DNA停留在加样孔中,形成一条明亮条带。反应条件优化试验结果显示,连接序列浓度为2μmol/L、锁式探针浓度为1μmol/L (连接序列和锁式探针的比为2∶1) T4 DNA连接酶为350 U、连接180 min时连接效率最高。在100μl的扩增体系中,dNTP浓度为0.5μmol/L,扩增240 min时,RCA扩增扩增效果最佳。优化后RCA的最低检测浓度为10 pmol/L。RCA检测健康家兔和豆状囊尾蚴感染家兔血清miRNA样品的平均荧光值分别为53.298±1.707和97.498±5.892,差异有统计学意义(t=7.206, P <0.01)。ROC分析结果显示,当阳性临界值为61.69时,RCA方法的敏感性和特异性均为95%, AUC为0.955 0,似然比为19.00。RCA检测豆状囊尾蚴感染后不同时间的家兔血清miRNA结果显示,20份阴性血清中19份检测结果为阴性,1份为阳性;感染后1个月的血清中,17份为阳性,2份为疑似,1份为阴性;感染后2个月的血清,1份为阴性,其余为阳性;感染后3个月的血清,3份为阴性,其余为阳性。结论 建立了检测家兔豆状囊尾蚴感染的RCA方法,该方法在豆状囊尾蚴感染后3个月内的家兔血清中检出novel-miR1,具有良好的应用潜力。
分类号:
- 相关文献
[1]猪圆环病毒2型新疆株全基因组的滚环扩增与序列分析. 翟少伦,岳城,冉多良,龙进学,袁世山. 2010
[2]Identification and expression profiling of circulating mi-crornas in serum of cysticercus pisiformis-infected rabbits. Guoliang Chen,Liqun Wang,Tingli Liu,Yanping Li,Shaohua Zhang,Hong Li,Xuenong Luo. 2021
[3]Cysticercus pisiformis-derived novel-miR1 targets TLR2 to inhibit the immune response in rabbits. Guoliang Chen,Guiting Pu,Liqun Wang,Yanping Li,Tingli Liu,Hong Li,Shaohua Zhang,Xuelin Wang,Xiaolei Liu,Xuenong Luo. 2023
作者其他论文 更多>>
-
猪带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制分子Ts-serpin-2对人THP-1细胞炎性细胞因子的表达影响
作者:毕研丽;刘仲藜;郭爱疆;张少华;王帅;才学鹏
关键词:猪带绦虫;丝氨酸蛋白酶抑制分子;真核表达;THP-1细胞;炎性细胞因子
-
玉米种质资源抗腐霉茎腐病和镰孢茎腐病精准鉴定
作者:段灿星;曹言勇;董怀玉;夏玉生;李红;胡清玉;杨知还;王晓鸣
关键词:玉米种质;腐霉茎腐病;镰孢茎腐病;茎基部注射接种;自然发病鉴定;精准鉴定
-
需求决定市场,行业交融让农机越来越贴心
作者:李艳萍;赵明慧
关键词:
-
多房棘球蚴诱导小鼠枯否氏细胞极化相关ceRNA调控网络的构建与分析
作者:李艳萍;刘婷丽;李红;陈国梁;王立群;郭小腊;骆学农
关键词:多房棘球蚴;M2型巨噬细胞极化;ceRNA;调控网络
-
豆状囊尾蚴体外培养方法的建立及其分泌产物的分离鉴定
作者:张少华;刘婷丽;骆学农;王帅;郭爱疆;白雪;陈国梁;才学鹏
关键词:豆状囊尾蚴;体外培养;长期;分泌产物;免疫电镜
-
"三新四变五增"田园综合体果树发展模式,助力沂蒙山区乡村振兴
作者:李艳萍;杨超飞
关键词:
-
多房棘球蚴感染对小鼠肝脏脂质代谢的影响
作者:李红;李艳萍;刘婷丽;陈国梁;王立群;郭小腊;骆学农
关键词:多房棘球蚴;肝实质细胞;脂质代谢;脂质沉积